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血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法
血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法
摘要：目的：探討分析血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法。
方法：對目前較為常用的4種血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法進(jìn)行對比，4種方法分別為皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法和間接凝血試驗(yàn)，對比4種方法檢驗(yàn)的敏感性和各自的優(yōu)勢和劣勢。
結(jié)果：我們的試驗(yàn)結(jié)果顯示4種方法檢測血吸蟲病的陽性率分別為皮內(nèi)試驗(yàn)94.30%、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)96.80%、酶聯(lián)免疫法98.10%、間接血凝試驗(yàn)92.70%，4種方法的陽性率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)差異不明顯，P>0.05，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論：4種方法都具有較高的檢查敏感性，但又各具特點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該靈活結(jié)合努力發(fā)揮每種方法最大的優(yōu)勢，使其為臨床診斷提供更為可靠和準(zhǔn)確的結(jié)果。
關(guān)鍵詞：血吸蟲病免疫學(xué)檢驗(yàn)陽性率臨床診斷
血吸蟲病是一種嚴(yán)重的寄生蟲病對人體危害極大，血吸蟲的傳染源為哺乳類動(dòng)物，常見的感染情況為人畜共患。
感染人群一般都是接觸了被污染的疫水、土壤、食物等進(jìn)而患病[1]。
病蟲感染宿主后通常會有一段潛伏期，因而臨床及時(shí)有效的診斷是提高患者治愈率的關(guān)鍵。
感染后患者常會出現(xiàn)咳嗽、咯血、發(fā)熱、嗜酸性粒細(xì)胞增加等癥狀，如果患者靜脈壁受損還可能發(fā)生血栓。
臨床診斷時(shí)醫(yī)生除了觀察患者的具體癥狀，還要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測、免疫學(xué)檢測、超聲檢測等結(jié)果做出最終判斷[2]。
我們對目前較為流行的4種血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法(皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法和間接凝血試驗(yàn))進(jìn)行對比分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。
1資料和方法
1.1背景資料。
選取成熟血吸蟲的蟲卵作為研究對象，由于蟲卵內(nèi)部毛蚴的分泌排泄物抗原性較強(qiáng)，因而可以和血吸蟲宿主的血清相作用進(jìn)而形成特異性的沉淀物質(zhì)。
1.2試驗(yàn)方法。
對目前較為常用的4種血吸蟲病的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法進(jìn)行對比，4種方法分別為皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法和間接凝血試驗(yàn)，具體試驗(yàn)方法如下。
1.2.1皮內(nèi)試驗(yàn)。
按照1∶3000的比例制備新鮮成蟲勻漿，使用無菌注射器和皮試針頭對受試者進(jìn)行皮試注射，注射劑量為0.05ml。
注射完畢后等待15分鐘觀察結(jié)果，具體為檢查受試者的注射部位是否出現(xiàn)丘疹，如果出現(xiàn)要測量其最大直徑，最大直徑大于或等于1.0cm的為陽性反應(yīng)。
1.2.2環(huán)卵沉淀試驗(yàn)。
抽取受試者的血液樣本進(jìn)行離心處理獲得血清，用融化的石蠟在干凈的載玻片上劃2道間距約為20mm的直線，待石蠟干燥后在2道線間滴加2滴受試者的血清。
然后再向血清中加入約100個(gè)干燥的蟲卵混勻，覆上蓋玻片并用石蠟密封四周。
將玻片置于溫箱中培育48小時(shí)后在顯微鏡下觀察結(jié)果。
根據(jù)蟲卵周圍出現(xiàn)的沉淀物的大小進(jìn)行陽性判斷。
1.2.3酶聯(lián)免疫法。
首先制備實(shí)驗(yàn)組，使用日本血吸蟲可溶性蟲卵粗抗原(1∶3000)包被聚苯乙烯板，在4℃的溫箱內(nèi)過夜培育，第二天進(jìn)行沖洗再加入受試者的血清樣本(1∶200，吐溫-PBS稀釋)，按照同樣的方法制備對照組，對照組不加血清樣本。
最后向?qū)嶒?yàn)組和對照組中加入底物進(jìn)行顯色處理，并使用酶標(biāo)比色計(jì)讀取吸光度值。
1.2.4間接凝血試驗(yàn)。
先在U型微量血凝板的第一排的第一孔、第二孔、第三孔和第四孔內(nèi)分別滴加0.9%的氯化鈉溶液，再向第一孔加入血清樣本混勻，對第二、三、四孔依次根據(jù)遞減稀釋法進(jìn)行滴加。
在第三孔和第四孔內(nèi)加入稀釋后的致敏紅細(xì)胞懸液，旋轉(zhuǎn)震搖混勻后在室溫下靜置1小時(shí)后觀察記錄結(jié)果。
根據(jù)四個(gè)孔內(nèi)的陽性反應(yīng)情況判斷是否為血吸蟲病患者。
1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法。
使用SPSS19.0對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，統(tǒng)計(jì)分析方法使用卡方檢驗(yàn)和ANOVA，P<0.05，為差異統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。
2結(jié)果
我們的試驗(yàn)結(jié)果顯示4種方法檢測血吸蟲病的陽性率分別為皮內(nèi)試驗(yàn)94.30%、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)96.80%、酶聯(lián)免疫法98.10%、間接血凝試驗(yàn)92.70%，見表1。
對皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法和間接凝血試驗(yàn)的陽性率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)差異不明顯，P>0.05，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3討論
血吸蟲病是一種嚴(yán)重的寄生蟲類疾病，根據(jù)世界衛(wèi)生組織1995年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，全球受該病威脅的人口達(dá)6億多，其中感染人口接近2億。
可以感染人體的血吸蟲主要為曼氏血吸蟲、埃及血吸蟲、日本血吸蟲、間插血吸蟲、湄公血吸蟲和馬來血吸蟲等，我國是該病的高發(fā)區(qū)域，發(fā)病人群主要集中在長江流域和南方一些地區(qū)[2]。
血吸蟲的傳染源為哺乳類動(dòng)物，常見的感染情況為人畜共患，多種因素都可以影響血吸蟲病的流行，如氣溫、水源、土壤、人口流動(dòng)、社會制度等。
一般而言，感染人群都是接觸了被污染的疫水、土壤、食物等進(jìn)而患病。
感染后患者常會出現(xiàn)咳嗽、咯血、發(fā)熱、嗜酸性粒細(xì)胞增加等癥狀，如果患者靜脈壁受損還可能發(fā)生血栓。
臨床診斷時(shí)醫(yī)生除了觀察患者的具體癥狀，還要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測、免疫學(xué)檢測、超聲檢測等結(jié)果做出最終判斷[3]。
對血吸蟲病的免疫學(xué)檢測通常采用血吸蟲尾蚴和蟲卵制備抗原，目前較為常見的方法包括皮內(nèi)試驗(yàn)、環(huán)卵沉淀試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫法、間接血凝試驗(yàn)4種方法。
我們對4種方法的陽性率進(jìn)行對比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)差異不明顯，4種方法的陽性率均可達(dá)90%以上，說明都具有較高的敏感性[4]。
臨床通常使用皮內(nèi)試驗(yàn)進(jìn)行普通過篩，對出現(xiàn)陽性的可疑人群進(jìn)一步檢查。
這種方法還可以用于檢查低齡人群是否出現(xiàn)新的感染以考核防治的效果。
皮內(nèi)試驗(yàn)對肺吸蟲有部分的交叉反應(yīng)。
該法也不適用于藥物療效的考核，因?yàn)榛颊咴谥斡蟮妮^長時(shí)間內(nèi)仍會顯示陽性反應(yīng)。
對于治愈患者使用環(huán)卵沉淀反應(yīng)進(jìn)行檢測會發(fā)現(xiàn)反應(yīng)強(qiáng)度逐漸減弱，因而可以考核療效。
環(huán)卵沉淀反應(yīng)對絲蟲病、肺吸蟲等患者的血清有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)。
這種方法常被用于流行疫區(qū)治療效果的評價(jià)。
酶聯(lián)免疫法的檢測優(yōu)勢在于和一般常見的寄生蟲沒有明顯的交叉反應(yīng)。
間接血凝試驗(yàn)也可以反映治愈患者的血清變化情況，但是由陽性轉(zhuǎn)陰的速度比較緩慢，該法對肺吸蟲患者的血清也有部分交叉反應(yīng)[5]。
由此可見4種方法都具有較高的檢查敏感性，但又各具特點(diǎn)，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該靈活結(jié)合努力發(fā)揮每種方法最大的優(yōu)勢，使其為臨床診斷提供更為可靠和準(zhǔn)確的結(jié)果。
參考文獻(xiàn)
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