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崗梅水提取物抗炎作用的實驗研究論文
目的 研究崗梅水提取物的抗炎作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹法、大鼠棉球肉芽腫法和醋酸致小鼠毛細血管通透性增高法觀察崗梅水提取物的抗炎作用。結(jié)果 崗梅水提取物能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠所致的大鼠足跖腫脹及炎性組織中PGE2的生成，減少大鼠棉球肉芽腫的形成，同時對醋酸所致小鼠毛細血管通透性增高具有顯著抑制作用。 結(jié)論 崗梅水提取物具有明顯抗炎作用。Abstract:Objective To study the anti-inflammatory activity of the water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae. Methods The models of xylene-induced ear edema in mice, hind paw edema induced with carrageen in rats, granuloma induced with cotton ball in rats, and capillary permeability increase induced with acetic acid in mice were used to observe the anti-inflammatory effects. Results The water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae could inhibit xylene-induced ear edema and capillary permeability increase in mice, hind paw edema and PGE2 increase induced with carrageen and granuloma induced with cotton ball in rats. Conclusion The water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae has significant anti-inflammatory effects.
Key words:Radix et Caulis Ilicis Asprellae；water extract；anti?inflammatory；mice
崗梅是冬青科植物梅葉冬青Ilex asprella(Hook .et Arm.) champ. ex Benth.的干燥根及莖。其味苦、微甘、性涼。有清熱解毒、生津止渴、利咽消腫、散瘀止痛之功， 常用于感冒發(fā)熱、肺熱咳嗽、熱病津傷口渴等［1］ 。崗梅主產(chǎn)于兩廣地區(qū)（廣東、廣西），是多種涼茶中的主要藥味，應用較廣。但目前尚未見有關崗梅水提取物抗炎作用的系統(tǒng)報道，筆者對崗梅水提取物進行抗炎作用的動物實驗研究，報告如下。
1 材料與方法
1.1 藥物及試劑 崗梅水提取物采用水煎法自制，方法為：取適量崗梅，每次用8倍量水煎煮1 h，共2次，合并2次水煎煮液，濃縮，備用；阿司匹林片：河北石家莊制藥集團生產(chǎn)，批號：041114；烏拉坦：國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)，批號：E60521；二甲苯：廣東光華化學廠有限公司生產(chǎn)，批號：20050218；角叉菜膠購自美國Sigma公司， 批號：59C-0328；青霉素和鏈霉素混合液（每毫升含800 U青霉素和650 U鏈霉素）。
1.2 動物 昆明種小鼠，雄性，體質(zhì)量20～24 g，SPF級，由第一軍醫(yī)大學實驗動物中心提供，動物合格證號：2004A063號；SD大鼠，雄性，體質(zhì)量150～180 g，清潔級標準，由中山大學實驗動物中心提供，動物合格證號：粵檢證字2003A070。
1.3 儀器 大鼠足跖容積測定裝置，參照文獻［2］方法定制。
1.4 方法
1.4.1 對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響［2］取昆明種小鼠60只，隨機分為正常對照組、模型對照組、崗梅水提取物低、中、高劑量組、陽性對照藥物（阿司匹林）組，共6組，每組10只，實驗前小鼠禁食不禁水12 h，然后各組小鼠按0.1 mL/10 g體質(zhì)量灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中正常對照組和模型對照組給等體積蒸餾水。末次給藥后30 min，除正常對照組外，其余各組小鼠于右耳正反兩面涂上二甲苯50 μL致炎，致炎1 h后脫頸椎處死動物，用直徑9 mm打孔器沖下左耳和右耳同一部位的圓片，于分析天平上稱重，以兩耳片重差值為炎癥腫脹度。
1.4.2 對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及炎癥組織中PGE2（前列腺素E2）的影響［2］取SD大鼠50只，隨機分為空白對照組、崗梅水提取物低、中、高劑量組、陽性對照藥物（阿司匹林）組，共5組，每組10只。實驗前大鼠禁食不禁水12 h，然后各組大鼠按1 mL/100 g體質(zhì)量灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中空白對照組給等體積蒸餾水。末次給藥后1 h，先按容積測定方法測量各鼠右踝關節(jié)以下容積，然后于各鼠右后足跖皮下注射ρ=1%角叉菜膠0.1 mL致炎，分別于致炎后1 h、2 h、3 h、4 h時，按原法測量右踝關節(jié)以下容積。測完后，頸椎脫臼處死大鼠，于踝關節(jié)上0.5 cm 處剪下炎性腫脹足稱重，將以上剪下的致炎足剝皮，剪碎放入5 mL生理鹽水中浸泡1 h 后，離心足浸出液，取上清液0.1 mL,加0.5 mol·L-1 KOH-甲醇液2 mL ,在50 ℃下異構(gòu)化20 min ,用甲醇稀釋至5 mL,于波長278 nm處測定吸光度(A)值， A值的大小反應PGE2的含量。
1.4.3 對大鼠棉球肉芽腫的影響［3］取SD大鼠50只，每只大鼠按1 g/kg體質(zhì)量腹腔注射烏拉坦進行麻醉，在各鼠的左右蹊部用碘酒消毒，75%（φ）乙醇脫碘后，各切開1 cm長小口，用眼科鑷子將已稱重為30 mg的滅菌脫脂棉球（直徑6.5 ～8.5 mm）一個植入皮下，每個棉球加青霉素和鏈霉素混合液0.3 mL，以防感染，隨即縫合皮膚。將所有大鼠隨機分為空白對照組、崗梅水提取物低、中、高劑量組、陽性對照藥物（阿司匹林）組，共5組，每組10只，實驗前大鼠禁食不禁水12 h，術后2 h開始按1 mL/100 g體質(zhì)量灌胃給藥，其中空白對照組給等體積蒸餾水，1次/d，共7 d。在第8天殺死動物，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剝出周圍已包裹肉芽組織的棉球，剔除脂肪組織，在60 ℃烘箱放置12 h后稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫凈重。
1.4.4 對醋酸致小鼠毛細血管通透性增高的影響［3］取昆明種小鼠50只，隨機分為空白對照組、崗梅水提取物低、中、高劑量組、陽性對照藥物（阿司匹林）組，共5組，每組10只，實驗前小鼠禁食不禁水12 h，然后各組小鼠按0.1 mL/10 g體質(zhì)量灌胃給藥，1次/d，共7 d，其中空白對照組給等體積蒸餾水。末次給藥后1 h，各組小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1 mL/10 g體質(zhì)量，隨即ip 0.6%（φ）醋酸0.1 mL/10 g體質(zhì)量，20 min后，斷頭放血處死小鼠，腹腔注射 6 mL生理鹽水，輕揉腹部，收集腹腔洗出液，1 000 r/min離心5 min,取上清液用紫外－可見分光光度計于590 nm處測吸光度值(A值)。
1.5 統(tǒng)計學處理 實驗數(shù)據(jù)以±s表示，采用SPSS統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理，以P＜0.05為差異有顯著性。
2 結(jié)果
2.1 崗梅水提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 崗梅水提取物中、高劑量組的耳重差與模型組比較，差異具有顯著性（P< 0.01），說明崗梅水提取物能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹，提示崗梅水提取物對急性炎性腫脹具有抑制作用。見表1。
2.2 崗梅水提取物對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及炎癥組織中PGE2含量的影響 低、中、高劑量崗梅水提取物對角叉菜膠致炎后1 h、2 h、3 h、4 h時大鼠的足跖腫脹及炎癥組織中PGE2含量增加均具有明顯的抑制作用（P<0.05或0.01），提示崗梅水提取物對急性炎性腫脹具有顯著抑制作用。見表2。
2.3 崗梅水提取物對大鼠棉球肉芽腫的影響 崗梅水提取物低、中、高劑量組的棉球肉芽腫凈重與空白對照組比較，差異具有顯著性（P<0.05或0.01），說明崗梅水提取物組能明顯抑制大鼠棉球肉芽腫的形成，提示崗梅水提取物具有一定的抗炎作用。見表3。
2.4 崗梅水提取物對醋酸致小鼠毛細血管通透性增高的影響 崗梅水提取物低、中、高劑量組腹腔洗出液的吸光度值與空白對照組比較，差異具有顯著性（P<0?05或0.01），說明崗梅水提取物組能明顯抑制醋酸致小鼠毛細血管通透性增高，提示崗梅水提取物對炎性過程中毛細血管通透性增高具有一定的抑制作用。見表4。
表1 崗梅水提取物對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響（略）
Tab.1 The effects of the water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae on xylene-induced ear edema in mice
與模型對照組比較：**P<0.01；與正常對照組比較： ＃P<0.01(t檢驗）
表2 崗梅水提取物對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹及炎癥組織中PGE2含量的影響（略）
Tab.2 The effects of the water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae on hind paw edema and PGE2 increase induced with carrageen in rats
與空白對照組比較：*P<0.05；**P<0.01(t檢驗）
表3 崗梅水提取物對大鼠棉球肉芽腫的影響（略）
Tab.3 The effects of the water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae on granuloma induced with cotton ball in rats
與空白對照組比較：*P<0.05；**P<0.01(t檢驗）
表4 崗梅水提取物對醋酸致小鼠毛細血管通透性增高的影響（略）
Tab.4 The effects of the water extract from Radix et Caulis Ilicis Asprellae on capillary permeability increase induced with acetic acid in mice
與空白對照組比較：*P<0.05；**P<0.01(t檢驗）
3 討論
崗梅為兩廣地區(qū)的藥材，有清熱解毒、生津止渴、利咽消腫、散瘀止痛之功，民間多用于涼茶。關于崗梅現(xiàn)代研究的文獻報道較少，化學研究表明：崗梅中含有三帖皂苷、內(nèi)酯、生物堿、赪酮甾醇、赪酮甾醇3?O?β?D?葡萄糖苷、丁香脂素、丁香脂素?O?β?D?葡萄糖苷和19?去氫烏索酸�，F(xiàn)代藥理學研究表明：崗梅在體外試驗中對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌有抑制作用；可增加豚鼠離體心臟冠脈流量和心收縮力；對垂體后葉素所致家兔急性心肌缺血T波改變有保護作用［1，4］。但與崗梅“清熱解毒”功效密切相關的抗炎作用未見系統(tǒng)的研究報道。
炎癥是機體活組織在各種損傷刺激下所表現(xiàn)的以防御為主的反應，炎癥滲出、組織腫脹是炎癥早期的重要指標，在炎癥晚期和慢性炎癥期，表現(xiàn)為巨噬細胞和成纖維細胞增生，形成肉芽組織［5］。
本研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹法、大鼠棉球肉芽腫法和醋酸致小鼠毛細血管通透性增高法等經(jīng)典動物實驗方法，考察崗梅水提取物對炎癥發(fā)生的早期和晚期的影響。結(jié)果表明：崗梅水提取物既可抑制炎癥早期的水腫和滲出，又可抑制炎癥晚期的組織增生和肉芽組織的生成，且能降低局部炎癥組織中PGE2含量，提示崗梅水提取物具有顯著的抗炎作用，且其抗炎機制之一可能與減少炎癥組織中PGE2合成有關。本研究對崗梅清熱解毒的功效進行了有益的探索，其實驗結(jié)果為崗梅及相關涼茶的應用提供了一定的實驗依據(jù)，但崗梅水提取物抗炎的作用機制及水提取物中發(fā)揮抗炎的物質(zhì)基礎尚需進一步研究。
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