田七顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

　　畢業(yè)論文是教學(xué)科研過程的一個環(huán)節(jié)，也是學(xué)業(yè)成績考核和評定的一種重要方式。畢業(yè)論文的目的在于總結(jié)學(xué)生在校期間的學(xué)習(xí)成果，培養(yǎng)學(xué)生具有綜合地創(chuàng)造性地運(yùn)用所學(xué)的全部專業(yè)知識和技能解決較為復(fù)雜問題的能力并使他們受到科學(xué)研究的基本訓(xùn)練。

　　【摘要】 目的 建立田七顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC法對處方中的三七進(jìn)行定性鑒別,用HPLC法對制劑中人參皂苷Rg1與三七皂苷R1進(jìn)行定量測定。結(jié)果 在TLC鑒別中能檢出三七,人參皂苷Rg1在0.628～5.652 μg(r=0.999 8)、三七皂苷R1在0.155～1.395 μg(r=0.999 8)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,平均回收率分別為99.24%(RSD=0.84%)和99.14%(RSD=1.13%)。結(jié)論 本方法操作簡便,準(zhǔn)確,重復(fù)性好,精密度高,可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

　　【關(guān)鍵詞】 田七顆粒;薄層色譜法;人參皂苷Rg1;三七皂苷R1;高效液相色譜法

　　田七顆粒主要以三七為原料加工制成,具有活血定痛、祛瘀生新的作用。三七主要含人參皂苷Rb1、Rg1、Re和三七皂苷R1等20余種皂苷成分,其中人參皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷R1是含量最高的3個成分,三七皂苷R1又是三七的特征性成分[1]。本試驗對制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究,用TLC法對處方中的三七進(jìn)行了定性鑒別,并采用HPLC法測定田七顆粒中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量,方法簡便,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

　　1 儀器與試藥

　　Agilent1100系列高效液相色譜儀：G1311A四元泵,G1313A自動進(jìn)樣器,G1379A脫氣機(jī),G1314VWD檢測器,Agilent1100化學(xué)工作站;UV-2201型紫外-可見分光光度儀。

　　田七顆粒,廣西玉林制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn);人參皂苷Rg1和三七皂苷R1對照品(供含量測定用,批號：人參皂苷Rg1為0703-9914、0703-9813,三七皂苷R1為0745-200109),均由中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇、乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純。

　　2 定性鑒別

　　取本品2 g,研細(xì),加甲醇20 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇2 mL使溶解,作為供試品溶液。另取缺三七的陰性對照品2 g,同法制成陰性對照品溶液。再取人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷 R1對照品,分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗,吸取供試品溶液、對照品溶液及陰性對照液各2 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以10%硫酸乙醇溶液,105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中,在與人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1和三七皂苷R1對照品相應(yīng)的位置上,顯紅色的斑點(diǎn),而陰性對照液無相應(yīng)斑點(diǎn)。

　　3 含量測定

　　3.1 色譜條件

　　Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流動相：乙腈-0.05%磷酸溶液(18∶82);流速：1.0 mL/min;檢測波長：203 nm;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按三七皂苷R1計算應(yīng)不低于3 000。

　　3.2 對照品溶液的制備

　　分別精密稱取人參皂苷Rg1和三七皂苷R1對照品適量,加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg1 0.396 mg和三七皂苷R1 0.092 mg的混合溶液,搖勻,即得。

　　3.3 供試品溶液的制備

　　取本品適量,研細(xì),取約1.2 g,精密稱定,加水適量使溶解并轉(zhuǎn)移至分液漏斗中,用水飽和的正丁醇萃取3次,每次20 mL,合并正丁醇萃取液,加氨試液洗滌2次,每次20 mL,棄去氨試液,正丁醇層蒸干,殘渣加甲醇溶解并移入10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用0.45 μm濾膜濾過,作為供試品溶液。

　　3.4 空白試驗

　　按處方及制備工藝制備不含三七藥材的陰性樣品,再按供試品溶液的制備方法制備并測定。按照上述色譜條件,吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL,分別注入色譜儀,進(jìn)行測定。結(jié)果供試品色譜中,在與對照品色譜相應(yīng)的位置上,分別有相同保留時間的色譜峰,而陰性對照在此保留時間無干擾(見圖1)。因此,可在此系統(tǒng)條件下對人參皂苷Rg1和三七皂苷R1進(jìn)行定量分析。

　　3.5 線性關(guān)系的考察

　　精密稱取人參皂苷Rg1對照品31.4 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為人參皂苷Rg1對照品貯備液(0.628 mg/mL)。分別精密吸取貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成濃度分別為0.062 8、0.188 4、0.314 0、0.439 6、0.565 2 mg/mL的溶液。分別精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,記錄峰面積。以人參皂苷Rg1對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y=209.713X-0.260,r=0.999 8,人參皂苷Rg1在0.628～5.652 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

　　精密稱取三七皂苷R1對照品7.75 mg,置50 mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為三七皂苷R1對照品貯備液(0.155 mg/mL)。分別精密吸取貯備液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,制成濃度分別為0.015 5、0.046 5、0.077 5、0.108 5、0.139 5 mg/mL的溶液。分別精密吸取10 μL,注入液相色譜儀,記錄峰面積。以三七皂苷R1對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程：Y=208.065X-2.85,r=0.999 8,三七皂苷R1在0.155～1.395 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

　　3.6 精密度試驗

　　取對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分別為0.56%和0.69%,表明精密度良好。

　　3.7 重復(fù)性試驗

　　取同一批號(030102)的田七顆粒,共6份,按“3.3”項制備,進(jìn)樣,測定峰面積,人參皂苷Rg1平均含量為3.708 mg/g, RSD=1.01%;三七皂苷R1平均含量為0.698 mg/g,RSD=0.92%。

　　3.8 穩(wěn)定性考察

　　精密吸取同一供試品溶液,分別于制備后12 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次,測定峰面積,人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的RSD分別為1.52%和1.47%,表明樣品溶液在12 h基本穩(wěn)定。

　　3.9 加樣回收率測定

　　取已知含量的樣品(人參皂苷Rg1含量3.708 mg/g和三七皂苷R1含量0.698 mg/g)6份,精密稱定,分別精密加入人參皂苷Rg1對照品貯備液4.5 mL和三七皂苷R1對照品貯備液3.5 mL,揮干甲醇后,按供試品溶液的制備方法制備,根據(jù)上面色譜條件測定峰面積,計算回收率,結(jié)果見表1、表2。 表1 人參皂苷Rg1加樣回收率試驗結(jié)果(略)表2 三七皂苷R1加樣回收率試驗結(jié)果(略)

　　3.10 樣品測定

　　分別精密吸取10 μL對照品溶液和供試品溶液,按上述色譜條件,注入色譜儀,測定,結(jié)果見表3。表3 樣品測定結(jié)果(略)

　　4 討論

　　在定性鑒別項下,曾選用氯仿-甲醇-水(65∶35∶10) 10 ℃以下的下層液作為展開劑,但其相對濕度應(yīng)控制在50%左右,濕度過高容易使斑點(diǎn)變形移位,所以選用了本試驗的正丁醇-乙酸乙酯-水(4∶1∶5)的上層溶液為展開劑。在含量測定項下,供試品溶液制備中還比較了另外的提取方法：乙醚脫脂和超聲提取,結(jié)果比本文的含量稍低,所以選擇了本試驗的提取方法。參考文獻(xiàn)[2],采用乙腈-0.05%磷酸溶液(23∶77),人參皂苷Rg1與三七皂苷R1分離好,但人參皂苷Rg1與其右側(cè)干擾峰分不開,調(diào)整乙腈-0.05%磷酸溶液比例為(18∶82)時,人參皂苷Rg1峰形好,跟干擾峰能達(dá)到很好的分離效果。

　　【參考文獻(xiàn)】

　　[1] 饒高雄,王興文.三七皂甙的檢測與分析方法[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2001,24(3)：4.

　　[2] 馮毅凡,孟 青,梁漢明.田七痛經(jīng)膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中成藥, 2005,27(10)：1146.

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