HPLC法測定安坤益母草片中鹽酸水蘇堿的含量論文

　　目的 建立安坤益母草片中鹽酸水蘇堿的含量測定方法。方法 采用氨基柱，以乙腈-水（體積比78∶22）為流動相，檢測波長是202 nm，流速是1 mL·min-1，柱溫是30 ℃。結(jié)果 鹽酸水蘇堿在5.625～28.125 μg內(nèi)有良好的線性關(guān)系，r＝0.9992，回收率為100.3％，RSD為2.4％。結(jié)論 本法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確、簡便，可為安坤益母草片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。
　　
　　安坤益母草片是由作者經(jīng)由安坤益母草膏改劑型而得，由益母草、川芎、白芍、地黃、當(dāng)歸等藥材組成。具有養(yǎng)經(jīng)調(diào)血、化淤生新的功效，臨床上主要用于血淤氣滯引起的月經(jīng)不調(diào)、行經(jīng)腹痛、量少色暗、產(chǎn)后淤血不凈等癥，取得滿意效果。益母草是方中君藥，鹽酸水蘇堿是有效成分之一，其測定方法有雷氏鹽沉淀溶解比色法［1］、紫外分光光度法［2］、薄層掃描法［3］、HPLC法［4］等。為更好地控制制劑質(zhì)量，確保臨床療效，本文采用HPLC法測定鹽酸水蘇堿的含量，結(jié)果表明方法專屬性強(qiáng)、精密度高、分離度好，可用于控制安坤益母草片中鹽酸水蘇堿的含量測定。
　　
　　1  儀器與試藥
　　
　　WATERS2695-2996型高效液相色譜儀（美國）。安坤益母草片（自制）；鹽酸水蘇堿對照品（批號：712-9903，中國藥品生物制品檢定所）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。
　　
　　2  方法與結(jié)果
　　
　　2.1  色譜條件
　　
　　色譜柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm,5 μm），大連依利特公司；流動相：乙腈-水（體積比78∶22）；流速：1 mL·min-1；檢測波長：202 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：15 μL。在此條件下，供試品中鹽酸水蘇堿峰能達(dá)到基線分離，理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計應(yīng)不低于4 000，分離度均是3.6。見圖1～3。
　　
　　圖1  鹽酸水蘇堿對照品HPLC圖譜（略）
　　
　　Fig.1  HPLC chromatogram of stachydrine hydrochloride
　　
　　圖2  安坤益母草片HPLC圖譜（略）
　　
　　Fig.2  HPLC chromatogram of Ankun Motherwort tablets
　　
　　圖3  安坤益母草空白片HPLC圖譜（略）
　　
　　Fig.3  HPLC chromatogram of blank control of Ankun Motherwort tablets
　　
　　2.2  溶液的配制
　　
　　2.2.1  對照品溶液的制備  精密稱取鹽酸水蘇堿對照品11.25 mg置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，得到1.125 mg/mL的鹽酸水蘇堿對照品溶液。
　　
　　2.2.2  供試品溶液的制備  取本品5片（0.25 g/片），除去薄膜衣，研細(xì)，精密稱取0.25 g，置具塞錐形瓶中，精密加入20 mL乙醇，超聲處理30 min，濾過，濾渣及容器用20 mL乙醇分次洗滌，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣加乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL的量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，離心（5 000 r/min，5 min），取上清液作為供試品溶液。
　　
　　2.2.3  鹽酸水蘇堿空白供試液的制備  按處方稱取除益母草外的藥材提取，取處方比例輔料，按安坤益母草片制備工藝制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”項下制備方法制得空白對照供試液。
　　
　　2.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
　　
　　精密量取鹽酸水蘇堿對照品溶液(1.125 mg/mL) 5、7、10、15、20、25 μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定鹽酸水蘇堿色譜峰面積，以鹽酸水蘇堿微克數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：y=5.89×104x-1.52×104 (r=0.9992)，線性范圍：5.625～28.125 μg。
　　
　　2.4  干擾試驗
　　
　　按“2.1”色譜條件，取鹽酸水蘇堿對照品溶液、供試品溶液、空白供試液，分別注入液相色譜儀，結(jié)果表明供試品色譜在與對照品色譜相應(yīng)位置上，有一相同的色譜峰，而空白供試液在此保留時間內(nèi)不出峰，表明其他成分對測定鹽酸水蘇堿無干擾。
　　
　　2.5  精密度試驗
　　
　　取對照品溶液(1.125 mg/mL) 15 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄鹽酸水蘇堿的峰面積。結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積RSD＝0.8％。
　　
　　2.6  穩(wěn)定性試驗
　　
　　取上述供試品溶液15 μL，分別在0、2、4、8、16、24 h進(jìn)樣，記錄鹽酸水蘇堿的峰面積，結(jié)果鹽酸水蘇堿峰面積的RSD=1.2%(n=6),表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)測定基本穩(wěn)定。
　　
　　2.7  重復(fù)性試驗
　　
　　取同一批安坤益母草片(批號：20070412)6份，按“2.2.2”項方法處理樣品并測定鹽酸水蘇堿峰面積，計算鹽酸水蘇堿含量，結(jié)果RSD=1.7%，表明此方法測定鹽酸水蘇堿含量重復(fù)性好。
　　
　　2.8  加樣回收試驗
　　
　　精密稱取已知含量的樣品(批號20070406，鹽酸水蘇堿含量10.8 mg/片)6份，每份取樣量為供試品取樣量（0.25 g/片）的50％，按“2.2.2”項方法操作，以當(dāng)前取樣含量的1∶1，分別精密加入鹽酸水蘇堿對照品溶液（1.08 mg/mL）5 mL，制備加樣回收供試品溶液，按含量測定條件測定，計算回收率，結(jié)果見表1。
　　
　　表1  鹽酸水蘇堿回收率試驗結(jié)果 (n=6)（略）
　　
　　Tab.1  Recovery of Stachydrine Hydrochloride
　　
　　2.9  樣品測定
　　
　　取5批（批號20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10個樣品，按“2.2.2”項方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。結(jié)果安坤益母草片鹽酸水蘇堿平均含量是10.33 mg/片。
　　
　　3  討論
　　
　　鹽酸水蘇堿結(jié)構(gòu)中既含有堿性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，極性大，在常規(guī)的C18柱中難保留［5］。以常規(guī)的生物堿分析方法很難將鹽酸水蘇堿分離，最后參考文獻(xiàn)［6］改用氨基柱，以乙腈-水（體積比78∶22）為流動相，在此條件下，鹽酸水蘇堿不僅能得到較好的保留，而且與其他峰完全分離，分離度達(dá)到要求。

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