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醫(yī)學(xué)生畢業(yè)論文
1 材料與儀器
1.1 材料及處理水芹菜采于湖北民族學(xué)院后山。將新鮮水芹菜洗凈，于60℃烘箱中烘干，粉碎，過(guò)孔徑60目篩，裝于棕色試劑瓶備用。
1.2 藥品大孔吸附樹(shù)脂NKA、NKA-9、X-5、AB-8（天津南開(kāi)大學(xué)生產(chǎn)）；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（進(jìn)口分裝），95%乙醇， 亞硝酸鈉， 硝酸鋁，氫氧化鈉，以上試劑均為分析純。
1.3 儀器AL204電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），LXJ-ⅡB離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠制造）， RE-201D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海棱光技術(shù)有限公司）。
2 方法
2.1 樹(shù)脂的預(yù)處理［9］將各種大孔吸附樹(shù)脂，分別用95%的乙醇浸泡24 h，并不時(shí)用玻璃棒攪拌，使樹(shù)脂和乙醇充分接觸，以便從孔中趕出空氣。將浸泡好的樹(shù)脂上柱先用95%的乙醇沖洗，直至流出液無(wú)白色為止。然后用2 BV（2倍的上柱的大孔樹(shù)脂的體積）的4%的NaOH沖洗，并關(guān)閉30 min，用蒸餾水洗至中性。再用2 BV的5%HCl沖洗 ，并關(guān)閉30 min，最后用蒸餾水洗至中性，處理完畢后用蒸餾水浸泡保存。
2.2 水芹菜黃酮粗提液的制備稱取一定量的樣品，料液比1∶35，乙醇濃度80%，在90℃的水浴鍋中回流提取2.5h，5 000 r/min離心15 min，取其上清液。將上清液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，濃縮液5 000 r/min離心15 min，取其上清液，即得到黃酮粗提液。
2.3 水芹菜黃酮測(cè)定方法［10］水芹菜黃酮含量測(cè)定采用以蘆丁為對(duì)照品的NaNO2-Al（NO3）3-NaOH顯色比色法。
2.4 大孔樹(shù)脂靜態(tài)吸附稱取各種濾干濕大孔樹(shù)脂1 g，放入相同型號(hào)的燒杯中，加入黃酮粗提液20 ml，放入電動(dòng)振蕩器上，振蕩吸附24 h，過(guò)濾，吸取吸附后的溶液0.4 ml測(cè)其吸光度，計(jì)算出樹(shù)脂在室溫下的吸附量和吸附率。取吸附飽和的樹(shù)脂，加入80%的乙醇20 ml，浸泡振搖4 h，過(guò)濾，取解吸后的溶液0.3 ml，測(cè)定濾液中黃酮的濃度，根據(jù)黃酮解吸量計(jì)算解吸率。
2.5 AB-8大孔樹(shù)脂動(dòng)態(tài)吸附上柱速率測(cè)定：取處理好的AB-8大孔吸附樹(shù)脂8g，裝柱約10 cm高。將6份50 ml 0.3mg·ml-1的黃酮粗提液分別以0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml·min-1的速率進(jìn)行上柱，再用5 BV的水洗柱，80%乙醇5 BV洗脫，然后測(cè)定其吸附率。
乙醇解吸濃度確定：將5份50 ml 0.3 mg ·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5ml·min-1的速率進(jìn)行上柱，再用5 BV的水洗柱，分別用5 BV20%，40%，60%，80%，95%的乙醇進(jìn)行洗脫，然后測(cè)其解吸率。乙醇洗脫體積確定：將6份50 ml 0.3 mg·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5 ml·min-1的速率進(jìn)行上柱，再用5 BV的水洗柱，分別用80%的乙醇2，4，5，6，7，8 BV進(jìn)行洗脫，然后測(cè)其解吸率。乙醇洗脫速率測(cè)定：將5份50 ml 0.3mg·ml-1的黃酮粗提液分別以1.5 ml·min-1的速率進(jìn)行上柱，再用5 BV的水洗柱，分別以0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 ml·min-1的速率進(jìn)行洗脫，洗脫劑為80%的乙醇5 BV，然后測(cè)其解吸率。
3 結(jié)果
上樣速率的選擇上樣速率一般都要求較慢，這是因?yàn)榱魉龠^(guò)快，吸附效果差，吸附不完全。但是流速過(guò)慢，會(huì)延長(zhǎng)生產(chǎn)周期，增加成本。因此有必要選擇一個(gè)合適的上樣速率使之既能達(dá)到一定的吸附率又能盡可能的節(jié)約時(shí)間。實(shí)驗(yàn)按“2.5”項(xiàng)的方法測(cè)定了上樣速率對(duì)吸附效果的影響，（見(jiàn)表4）。吸附率隨上樣速率的增快而降低，黃酮吸附率和上樣流速呈極顯著線性負(fù)相關(guān)，線性回歸方程為：Y=-4.314 8X+83.809 3（Y：吸附率%，X：上樣流速ml·min-1）。但是在綜合考慮吸附率和應(yīng)用于生產(chǎn)中的周期長(zhǎng)短，選取 1.5ml·min-1的上樣流速。
乙醇洗脫體積的選擇在確定了乙醇的最佳濃度之后，進(jìn)一步對(duì)洗脫液的最佳用量進(jìn)行了確定，其原則是在充分洗脫所吸附黃酮的前提下，盡量節(jié)省洗脫劑的用量。從表6可以看出，當(dāng)乙醇的洗脫用量達(dá)到5 BV時(shí)，解吸率為73.22.%，超過(guò)5 BV時(shí)，解吸率基本不再增加。因此，本實(shí)驗(yàn)所采用的乙醇洗脫體積為5 BV。
樹(shù)脂的富集能力配制黃酮濃度為0.3 mg·ml-1的黃酮水溶液50 ml，以1.5 ml·min-1的速率進(jìn)行上柱，再用5 BV的水洗柱，以1.0 ml·min-1的速率進(jìn)行洗脫，洗脫劑為80%的乙醇50 ml。收集流出液、水洗液及解吸液，測(cè)得解吸液黃酮濃度為0.212 mg·ml-1。分別取20 ml上柱前黃酮濃度為0.3 mg·ml-1的黃酮水溶液和上柱后的解吸液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中濃縮，烘干，冷卻。測(cè)得純化前黃酮純度為9.98%，純化后純度為25.8%，黃酮回收率為70.53%。
本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)4種不同型號(hào)的大孔吸附樹(shù)脂NKA、NKA-9、X-5、AB-8對(duì)水芹菜黃酮粗提物的靜態(tài)吸附和解吸性質(zhì)進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)AB-8大孔吸附樹(shù)脂在幾種常用的用于富集黃酮的大孔樹(shù)脂中吸附與解吸能力最好，并通過(guò)動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)對(duì)上樣速率、解吸液濃度、解吸液體積及洗脫速率進(jìn)行了研究，確定該樹(shù)脂的最佳條件為：以1.5 ml·min-1的流速上樣后，然后用5BV80%的乙醇以1.0 ml·min-1的速率洗脫。
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