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探究復(fù)乳法制備雪蓮納米粒
本文利用包含雪蓮有效成分的雪蓮注射液中間體為原料藥，將傳統(tǒng)的注射液改為復(fù)乳型納米溶液，為制成順應(yīng)性更高的劑型提供技術(shù)支持。希望可以幫助大家。
摘要： 目的利用雪蓮注射液中間體為原料，制備雪蓮納米粒，以提高患者對(duì)雪蓮用藥的順應(yīng)性和達(dá)到緩釋作用。方法以復(fù)乳法制備雪蓮納米粒，雪蓮原料藥溶解于乙二醇中作為內(nèi)水相，聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)溶解在二氯甲烷-丙酮(2∶1)的混和溶劑中作為油相，加入乳化劑形成W/O型初乳后以蒸餾水作為外水相在乳化劑作用下形成W/O/W型復(fù)乳納米溶液。結(jié)果納米粒的平均粒徑在134 nm;Zeta電位為-8.06;包封率為42.83%，載藥量為2.17%;12 h體外釋放39.57%。結(jié)論復(fù)乳法能夠得到性質(zhì)穩(wěn)定和具有緩釋功能的雪蓮納米粒。
關(guān)鍵詞： 雪蓮; PLGA 納米粒; 復(fù)乳法; 緩釋
雪蓮注射液的主要成分包括黃酮、多糖和生物堿類。其中黃酮類成分是雪蓮抗炎止痛的主要成分，能夠促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的合成，不但能顯著提高小鼠免疫功能，對(duì)抗風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎[1]，還具有抗癌、解痙、降壓和平喘作用[2，3]。生物堿能夠收縮血管，改變血管通透性從而起到強(qiáng)心、抗炎抗風(fēng)濕和鎮(zhèn)痛作用。多糖類成分則具有消除自由基、抗疲勞作用，并且能夠興奮子宮平滑肌，治療婦女小腹冷痛[1]。納米中藥作為中藥現(xiàn)代化的重要手段之一，為藥物在機(jī)體內(nèi)的吸收和發(fā)揮作用提供了更為廣泛的選擇，賦予傳統(tǒng)中藥以新的功能，如緩釋、增強(qiáng)靶向性、豐富給藥途徑、提高生物利用度、降低毒副作用等[4]。
1 、材料與儀器
1.1 試劑雪蓮原料藥(雪蓮注射液的中間體，新疆民族藥中藥研究所提供);聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA，50/50，M=15000，山東岱罡生物公司);蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品鑒定所);甲醇(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)為色譜純;氫氧化鈉、磷酸二氫鉀吐溫-80、司班-80(上海醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司)、二氯甲烷、丙酮、乙二醇、甲醇、乙腈等(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)均為分析純。
1.2 儀器BS124S 電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司; SPD-20A 島津高效液相色譜儀：日本島津公司;布魯克海文激光粒徑儀Zeta PLUS-90：美國(guó)布魯克海文儀器公司;GG-17旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海大研儀器有限公司;TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠;電鏡：JEM-2010/INCA OXFORD， 日本。
2 、方法[5，6]
2.1 納米粒的制備稱取10 mg雪蓮注射液中間體超聲溶解于1 ml乙二醇中，為內(nèi)水相，稱取33.9 mg PLGA加入燒杯中，加入2∶1的二氯甲烷-丙酮至重量為2.56 g，作為油相，加入司班-80 0.25 g，吐溫-80 0. 50 g，在油相中加入攪拌子，在磁力攪拌器上高速攪拌使油相和乳化劑混合均勻，然后用注射器抽取0.3 ml內(nèi)水相緩緩滴加到油相中，3 000 r/min攪拌形成具有藍(lán)色乳光的W/O型初乳。稱取吐溫-80 0.65 g，加入80 ml蒸餾水中作為外水相，在乳化劑作用下將制得的W/O型初乳滴入其中，900 r/min攪拌制得W/O/W復(fù)乳型納米溶液。最后將制得的納米溶液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上旋蒸，去除有機(jī)溶劑。
2.2 粒徑測(cè)量取適量雪蓮納米粒膠體分散體系加去離子水稀釋10倍，用激光散射粒度測(cè)定儀測(cè)定其粒徑平均大小。
2.3 Zeta電位將稀釋10倍的納米溶液靜置1 h，用Zeta電位儀測(cè)定其電位，平行測(cè)定6次。
2.4 透射電鏡實(shí)驗(yàn)(TEM)在經(jīng)透射電鏡掃描以前，對(duì)納米溶液應(yīng)進(jìn)行處理：配制2%的磷鎢酸溶液，將納米溶液滴加在銅網(wǎng)上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷鎢酸溶液進(jìn)行染色，再在燈下將所制樣品徹底烘干后進(jìn)樣觀察。
2.5 載藥量、包封率的測(cè)定采用HPLC法對(duì)納米粒的載藥量和包封率進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)雪蓮的有效成分采用蘆丁(Rutin)作為標(biāo)準(zhǔn)品，以黃酮類成分的含量反映藥物的含量。使用迪馬C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)在356 nm波長(zhǎng)下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5為流動(dòng)相[7];流速1ml/min。檢測(cè)得蘆丁的保留時(shí)間是4.86 min。取所制得的納米溶液1 ml，用0.1μm微孔濾膜濾去納米粒，濾液測(cè)定得游離藥物的量WF，1 ml納米溶液超聲破壞30 min，加4倍甲醇沉淀PLGA，10 000 r/min離心30 min， 進(jìn)樣測(cè)定所得濃度×5為藥物總量WT。每毫升納米溶液凍干后質(zhì)量為WN，每毫升納米溶液中藥物的投入量為WD。按下式計(jì)算包封率、載藥量。包封率(%)=(WT-WF)/ WT載藥量(%)= (WT-WF) /WN
2.6 體外釋放實(shí)驗(yàn)[8，9]本實(shí)驗(yàn)根據(jù)2005版《中國(guó)藥典》配制磷酸鹽緩沖液PBS (pH=7.4)作為釋放介質(zhì)，考察雪蓮納米粒的體外釋藥曲線。剪取10cm長(zhǎng)的透析袋，用沸水煮5～10 min，再用蒸餾水沖洗干凈。取納米溶液6 ml， 加12 ml釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)入透析袋中，檢查確保不漏液。將透析袋置于盛有70 ml釋放介質(zhì)(PBS)燒杯中，加攪拌子 37℃恒溫50 r/min恒速磁力攪拌。在0，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 ，24 h后從透析袋外取溶液1.5 ml，同時(shí)補(bǔ)充相同體積的釋放介質(zhì)。將取出的樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，計(jì)算其中藥物含量。配制相同藥物濃度的雪蓮原料藥的PBS溶液，按同樣方法測(cè)量釋放速率。
3、 結(jié)果
3.1 納米粒的制備和形態(tài)考察本實(shí)驗(yàn)采用復(fù)乳法制備雪蓮納米粒，主要以粒徑及包封率為表征參數(shù)，考察乳化劑和油相的用量對(duì)納米粒形成的影響。
3.1.1 納米粒的處方優(yōu)化處方優(yōu)化以能形成穩(wěn)定、大小適度的納米粒和較高的藥物包封率為前提，主要從乳化劑的種類和用量、水油相之比等納米粒形成的關(guān)鍵步驟來(lái)篩選優(yōu)化處方。見(jiàn)表1～3。表1 內(nèi)水相乳化劑的用量對(duì)納米粒成型的影響 表2 二氯甲烷-丙酮的體積比對(duì)鈉米粒成型及包封率的影響· 表3 油相(二氯甲烷-丙酮)的量對(duì)納米粒成型的影響。
3.1.2 粒徑測(cè)定粒徑，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。納米粒平均粒徑為134.6 nm。圖1 處方優(yōu)化后制備成納米粒的粒徑分布
3.1.3 Zeta電位用Zeta電位儀測(cè)定其電位，測(cè)得平均Zeta電位為-8.06。說(shuō)明納米溶液較穩(wěn)定。
3.1.4 透射電鏡實(shí)驗(yàn)(TEM)用透射電鏡觀察到納米粒的形態(tài)。見(jiàn)圖2。圖2 優(yōu)化后處方制備納米粒的電鏡圖 由電鏡照片看出納米粒形態(tài)為類球形，表面較光滑，大小均勻，納米粒之間基本無(wú)黏連。
3.2 載藥量、包封率和藥物利用率包封率(%)=WT-WF/WT=42.83%載藥量(%)=(WT-WF)/WN= 2.17%
3.3 體外釋放實(shí)驗(yàn)原料藥和納米粒的體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示：圖3 雪蓮原料藥和雪蓮納米粒體外釋放曲線由HPLC測(cè)定，計(jì)算納米粒溶液和雪蓮原料藥的體外累積釋放率得知，雪蓮原料藥體外釋放在2 h 達(dá)到82.14%，釋放速度很快。而在相同條件下，納米粒溶液在2 h時(shí)釋放為2.08%，12 h后達(dá)39.57%，釋放速度減緩，說(shuō)明所制得納米粒能達(dá)到較好的緩釋效果。
4 、討論
根據(jù)PLGA和雪蓮原料藥的理化特性，選用復(fù)乳法制備聚合物納米粒是行之有效的方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)改變油相成分及用量、乳化劑用量從而制備得到理化性質(zhì)較好的納米粒溶液。
通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)的考察，雪蓮納米粒與雪蓮原料藥相比能達(dá)到緩釋作用，但體內(nèi)是否能提高生物利用度，還有待于進(jìn)一步考察。
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