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粗茶中茶多糖的提取和測定的分析論文
茶多糖是一類從茶葉提取出來的與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起的酸性多糖或一種酸性糖蛋白,具有降血脂、降血糖、增強(qiáng)免疫力、抗輻射、降血壓、抗血凝、抗血等功效,是一種極具應(yīng)用和開發(fā)前景的天然產(chǎn)物,可廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、保健等領(lǐng)域。
在茶葉的種植和加工生產(chǎn)過程中,大量粗老枝葉和茶葉灰末等副產(chǎn)品常被丟棄,另外由于人們在茶葉消費時追求茶葉的檔次,使得中低檔茶葉滯銷而擠壓,造成了自然資源的巨大浪費。如果能從其中提取茶多糖作為保健食品的功能因子,則可變廢為寶,為粗茶和中低檔茶的綜合利用開辟一條新的途徑。
本試驗通過對粗老茶葉中的茶多糖的提取與測定,為粗茶的深度開發(fā)和利用提供一定的依據(jù)。
1實驗部分
1.1儀器和試劑
儀器:722型可見分光光度計(上海光學(xué)儀器),KQ-500VDB雙頻數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);超純水機(jī)(南京易普易達(dá)科學(xué)發(fā)展有限公司);電子天平(賽多利斯利科儀器(北京)有限公司)等。
試劑:無水乙醇,蒽酮,濃硫酸,葡萄糖,丙酮,無水乙醚等,所用的化學(xué)試劑均為分析純。
1.2茶多糖的提取
1.2.1工藝流程
粗老茶葉-烘干-研磨-溫水浸提-過濾-濃縮-乙醇沉淀-靜置-離心-無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替洗滌-烘干-茶多糖粗成品。
1.2.2具體步驟
稱取10 g粗茶,60 度干燥2 h,磨碎過40-50目篩,溫水浸提(80 度 ,80 min, 3次),過濾,減壓濃縮,沉淀劑,95%乙醇沉淀,離心(4000 r/min,10 min)得沉淀物,用無水乙醇、丙酮、無水乙醚交替攪拌洗滌2次干燥(60 度, 4 h),得粗茶多糖,稱量。
1.3蒽酮-硫酸試液的配制
稱取0.30 g蒽酮,加100 mL濃硫酸,置于棕色試劑瓶中,搖勻后置于冰箱中。
1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
稱取無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品適量,加蒸餾水配成1.008 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密移取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0. 2.0. 4.0. 6.0. 8.0. 10.0 mL分別置于100 mL容量瓶中,各加水至刻度,搖勻。分別精密移
取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液各2.0 ml置具塞試管中,以2 mL蒸餾水作空自,每管再加8 mL蒽酮-硫酸試液,立即搖勻,冰水浴冷卻。沸水浴中加熱7 min,流動水冷卻至室溫,10 min后在560 nm處測定吸光度,以吸光度(A)對葡萄糖濃度(C)作回歸處理,得回歸方程:C=105.0383 A-7.2499, r=0.9995 。
1.5換算因子的測定
精確稱取干燥至恒重的茶多糖0.0102 g,溶解后定量轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中,然后加純化水定容至刻度,80度水浴加熱,再超聲1 min增溶,搖勻,制得茶多糖貯備液。用蒽酮-硫酸法測定其吸光度,由回歸方程求出貯備液中葡萄糖的濃度,測得其葡萄糖含量,按下式計算換算因子。因茶多糖干燥后在水中溶解性降低,故按1.2.2項下的方法制得多糖提取液取等量兩份,經(jīng)乙醇沉淀洗滌后,一份直接加純化水溶解(復(fù)水性好),定容,測定吸光度和茶多糖含量;另一份干燥至恒重,稱得茶多糖的干重,由二者計算平均換算因子。
1.6茶多糖的測定
精確稱取粗茶葉1g,按照1.2.2項下方法制得茶多糖,然后將制得的茶多糖溶解后定量轉(zhuǎn)移于100 mL容量瓶中,加純化水溶解并稀釋至刻度,80 度水浴加熱,超聲1 min增溶,搖勻,制得茶多糖樣品液,蒽酮-硫酸分光光度法測定其吸光度,由回歸方程計算試液中葡萄糖濃度(C),按下式計算樣品中茶多糖含量。
2 結(jié)果與討論
2.1茶多糖提取最佳條件選擇
選擇浸提時間、浸提溫度、料液比三個因素、三個水平,進(jìn)行茶多糖提取最佳條件的選擇。
2.2重復(fù)性
精確稱取粗老茶葉1g,按照1.6項下方法處理后重復(fù)測定6次分別計算茶葉多糖含量,RSD=0.54,表明精密度良好。
2.3穩(wěn)定性
精確吸取1.6項下制取茶多糖樣品液1 mL于具塞試管中,每間隔1h測定溶液的吸光度,RSD=0.23 %(n=5),在5h內(nèi)顯色穩(wěn)定。
2.4加樣回收率
精確稱取3份粗老茶葉各1g,加入精制茶葉多糖約20 mg,按1.6項下方法測定茶葉多糖含量,計算回收率,回收率范圍為98.86%-102.32%。
3結(jié)論
本實驗采用蒽酮-硫酸法測定粗老茶葉中茶多糖的含量,方法快速、準(zhǔn)確、靈敏。由正交設(shè)計得出茶多糖提取的最佳工藝,結(jié)果表明粗老茶葉中茶多糖含量較高。
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