心脈龍對(duì)缺血再灌注損傷兔的保護(hù)作用

　　畢業(yè)論文是每個(gè)畢業(yè)生都要經(jīng)過(guò)的一道門(mén)檻，下面就讓我們學(xué)習(xí)下怎么寫(xiě)畢業(yè)論文?

　　【摘要】目的：研究心脈龍注射液對(duì)家兔低血容量性休克致缺血再灌注的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16只隨機(jī)分兩組，制備缺血再灌注(ischemiareperfusion，I-R)模型，心脈龍(XML)組8只，缺血30min，在灌注時(shí)從靜脈快速輸入自體血和20mL生理鹽水(心脈龍注射液加入其中，1.5ml/kg)(I-R+SM);對(duì)照組8只，缺血30min，靜脈輸入自體血和等量生理鹽水(I-R+SM)。各組動(dòng)物除回輸血液外，外加100 mL液體補(bǔ)充丟失的水分。觀察缺血前(BT)，I-R后30min，1h，2h血中超氧化物岐化酶(SOD)活力，NO-2/NO-3含量，血液pH值和尿量變化，結(jié)果：XML組血漿NO-2/NO-3含量高于對(duì)照組，I-R2h，對(duì)照組(4.08±1.95)цmol/L，XML組(7.56±1.21)цmol/L(P<0.01);SOD活力也高于對(duì)照組;XML組(70.05±9.87)Nu/mL;對(duì)照組(43.17±10.93)Nu/mL(P<0.01)。隨著SOD活力，NO-2/NO-3水平升高，酸中毒有所糾正，pH值逐漸上升，循環(huán)血流狀態(tài)改善，尿量增加。結(jié)論：心脈龍注射液對(duì)低血容量性休克致缺血再灌注兔有一定保護(hù)作用，其機(jī)制與增加SOD活力，促進(jìn)NO產(chǎn)生有關(guān)。

　　【關(guān)鍵詞】心脈龍;再灌注損傷;兔;超氧化物岐化酶;一氧化氮

　　缺血后再灌注，不僅不能使組織、器官的功能恢復(fù)，反而加重技能機(jī)構(gòu)的損害，目前研究認(rèn)為其發(fā)生與體內(nèi)超氧化物岐化酶(superoxide dismutase，SOD)活力，一氧化氮(nitric oxide,NO)水平變化有關(guān)[1，2]。心脈龍注射液(Xinmailong injecrion,XML)是我院藥學(xué)院發(fā)明的國(guó)家二類(lèi)新藥(中藥)，其在臨床上主要用于改善缺血導(dǎo)致的微循環(huán)障礙，對(duì)缺血再灌注方面的影響，目前研究尚少，本研究旨在探討心脈龍注射液對(duì)低血容量休克缺血再灌注兔的保護(hù)作用及其機(jī)制。

　　1　材料和方法

　　1.1　動(dòng)物模型健康家兔16只，雌雄不限，體重1.8～2.5kg，本院動(dòng)物室提供。3%戍巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈注射麻醉，分離一側(cè)頸總動(dòng)脈，肝素化后(800цg/kg)頸總動(dòng)脈插管連接三通和血壓測(cè)定裝置(PC-lab多道生物信號(hào)分析系統(tǒng))。

　　分離雙側(cè)輸尿管并插管，計(jì)數(shù)每分鐘尿量。經(jīng)三通管放血使血壓在10min內(nèi)由正常的16.2kpa降至5.3kpa，維持30min，失血量占總血量的50%。經(jīng)頸外靜脈快速回輸自體血液的20mL生理鹽水，外加100mL液體補(bǔ)充手術(shù)丟失的水分(1h內(nèi)輸完)。

　　1.2　分組和標(biāo)本采集

　　輸入自體血和等量鹽水(I-R+NS)。分別于失血前(beforeischemia，BI)，I-R后30min、1h、2h、頸外靜脈取血測(cè)定血漿SOD活力、NO代謝產(chǎn)物亞硝酸鹽/硝酸鹽(NO-2/NO3-)含量、血液pH值，并計(jì)數(shù)相應(yīng)時(shí)段每分鐘尿量(mL/min)。

　　1.3　檢測(cè)方法

　　SOD活力測(cè)定用黃嘌呤氧化酶法，試劑盒購(gòu)自南京建程生物工程研究所。NO含量測(cè)定用比色法：待測(cè)血漿經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后，同Griess試劑進(jìn)行重氮偶氮反應(yīng)，其產(chǎn)物在548nm處有最大吸收峰，用亞硝酸鹽做標(biāo)準(zhǔn)，721B型分光光度計(jì)測(cè)定NO-2/NO3-含量，間接反應(yīng)NO水平。

　　1.4　統(tǒng)計(jì)處理

　　數(shù)據(jù)均以±s表示，組內(nèi)=組間比較采用t檢驗(yàn)判斷差異顯著性。

　　2　結(jié)果

　　2.1　I—R時(shí)血漿NO-2/NO-3含量變化及SM對(duì)其影響I—R引起血漿NO-2/NO-3含量明顯下降，對(duì)照組I—R2h，亦有BI的(12.91±1.04)цmol/L降至(4.08±1.95)цmol/L，為BI的1/3(P<0.001)。SM組I—R各時(shí)點(diǎn)均較對(duì)照組有所回升，2h顯著高于對(duì)照組(p<0.01)，但仍低于BI水平(p<0.01)。

　　2.2　I—R時(shí)血漿SOD活力變化及SM對(duì)其影響

　　將兔隨機(jī)分兩組，XML組：缺血30min，再灌注時(shí)頸外靜脈快速輸入自體血和20mL生理鹽水(XML加入生理鹽水中，1.5ML/kg)(I-R+SM)。對(duì)照組：缺血30min，再灌時(shí)由表1可見(jiàn)，I—R后30min、1h、2h均較BI明顯下降(p<0.01，P<0.001)。SM注射液可有效防止SOD活力下降，I—(上接第22頁(yè))R后1h已有所增加，2h明顯高于對(duì)照組(p<0.01)表1。

　　2.3　I—R時(shí)血漿pH值變化及XML對(duì)其影響由表2可見(jiàn)，I—R克引起血液pH下降，對(duì)照組I—R2h已由BI7.34±0.02降至7.18±0.09(p<0.01)。SM可防止pH值已開(kāi)增高，2hpH值顯著高于對(duì)照組(p<0.01)。

　　2.4　尿量變化(mL/min)

　　缺血前，對(duì)照組0.15±0.03;XML組0.13±0.04，兩組比較無(wú)明顯差異(p>0.05).I-R30min,兩組均無(wú)尿，XML組委0.05±0.03，兩組比較有顯著差異(p<0.01);I-R2h，對(duì)照組仍無(wú)尿，XML組0.08±0.02，兩組比較有非常顯著差異(p<0.001)。

　　3　討論

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，免缺血再灌注后血漿NO-2/NO-3含量和SOD活力均逐漸下降;SM能夠阻止NO-2/NO-3水平下降;增加pH值，改善循環(huán)血液狀態(tài)，使尿量增加。

　　有研究證明

　　[1，2]缺血再灌注時(shí)由于大量自由基產(chǎn)生，使SOD消耗增多，活力下降，同時(shí)使血管內(nèi)皮細(xì)胞受損傷，NO合成釋放減少，滅活加快，加之缺血氧致酸中毒，NO濃度進(jìn)一步下降。NO為血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的內(nèi)皮細(xì)胞衍生舒張因子，正常情況下不斷產(chǎn)生進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+水平降低，平滑肌松弛，血管舒張[3]。病理情況下，NO合成釋放減少，滅活增加，血中NO濃度降低，輸血管作用減弱，縮血管作用增加，使血管壁增厚，管腔狹窄，血流減少，加之血小板聚集，粘附并釋放大量活性物質(zhì)，導(dǎo)致微循環(huán)障礙，內(nèi)臟血流減少，出現(xiàn)少尿或無(wú)尿。故缺血再灌注后血漿NO含量和SOD活力下降，互為因果，造成惡性循環(huán)。

　　心脈龍注射液是我院藥物研究所研制的國(guó)家二類(lèi)新藥，有研究報(bào)道心脈龍注射液能抑制缺氧/缺糖誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡及鈣超載，有神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用[4\\5]，同時(shí)有對(duì)抗氧自由基、減少腦出血時(shí)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用和對(duì)缺血再灌注心肌有保護(hù)作用[3、4]。因此，心脈龍注射液通過(guò)增加血漿SOD活力，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力。NO含量增加可以抑制纖維蛋白原與血小板結(jié)合，防止血小板粘附損傷的內(nèi)皮或沉積在損傷的血管壁上，組織血小板與其它細(xì)胞聚集，同時(shí)解聚已聚合的血小板，而被激活的血小板能釋放5-羥色胺，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放血管舒張因子NO[1]。NO本身具有抑制白細(xì)胞粘附、中和氧自由基爾拮抗過(guò)氧化作用[5]，同時(shí)擴(kuò)張血管，改善血液循環(huán)狀態(tài)。試驗(yàn)中觀察到XML組再灌注1h，家兔尿量明顯增強(qiáng)，表明內(nèi)臟血供開(kāi)始恢復(fù);血液pH值由再灌注后30min7.24±0.07逐漸增至7.31±0.04，也提示缺血再灌注后引發(fā)的酸中毒有所糾正。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，心脈龍注射液對(duì)缺血再灌注兔有一定保護(hù)作用。

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