注射用鹿瓜多肽細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法

　　注射用鹿瓜多肽細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法【1】

　　[摘要]目的研究注射用鹿瓜多肽對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查實(shí)驗(yàn)的干擾情況,并建立其細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

　　方法參照《中國藥典》2005年版二部附錄ⅪE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行試驗(yàn),用二個(gè)不同廠家的鱟試劑對注射用鹿瓜多肽進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。

　　結(jié)果注射用鹿瓜多肽稀釋成≥ 25倍時(shí)對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用。

　　結(jié)論用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法(凝膠法)檢測注射用鹿瓜多肽熱原是可行的。

　　[關(guān)鍵詞]細(xì)菌內(nèi)毒素; 注射用鹿瓜多肽; 鱟試劑

　　注射用鹿瓜多肽為注射用無菌粉末,常用于靜脈滴注,現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定用熱原法檢查 ,但其影響因素多,檢驗(yàn)成本大,耗時(shí)長。

　　為此,筆者探討注射用鹿瓜多肽的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法,來代替熱原檢查法,其實(shí)驗(yàn)方法如下。

　　1儀器與試劑

　　1.1樣品注射用鹿瓜多肽 批號(hào):20091152、20091046、20090935,規(guī)格8mg ,生產(chǎn)企業(yè):黑龍江迪龍制藥有限公司; 注射用鹿瓜多肽批號(hào)090622、090714、090806,規(guī)格8mg, 生產(chǎn)企業(yè):黑龍江江世藥業(yè)有限公司 。

　　1.2 試劑細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):150601-200965,規(guī)格180EU/ml,中國藥品生物

　　制品檢定所);鱟試劑(TAL):靈敏度0.25EU/ml,批號(hào)1002090, 湛江博康海洋生物有限公司; 0.25EU/ml 090416,湛江安度斯生物有限公司;細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水),內(nèi)毒素≤0.003EU/ml,批號(hào)W2008 04, 中國藥品生物制品檢定所)

　　1.3 儀器:ZH-2型旋渦混勻器;101-3型電熱恒溫干燥箱; ET-96型內(nèi)毒素凝膠法測定儀。

　　2方法與結(jié)果

　　2.1熱原檢查按熱原檢查法[1]操作,以上所取各生產(chǎn)企業(yè)的每批樣品熱原檢查均符合規(guī)定。

　　2.2TAL標(biāo)示靈敏度(λb)復(fù)核按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[2]操作,各批TAL靈敏度標(biāo)示符合規(guī)定。

　　2.3限值(L)的確定[2]按公式L=K/M確定,注射劑K為5EU/(kg・h);注射用鹿瓜多肽最大注射劑量為每次24mg,按60kg成人標(biāo)準(zhǔn)體重,1h最快給藥速度計(jì)算,即:L=K/M=12.5EU/mg

　　2.4注射用鹿瓜多肽細(xì)菌內(nèi)毒素限值為12.5EU/mg,對應(yīng)靈敏度0.5～0.03 EU/ml的鱟試劑,按公式計(jì)算,對應(yīng)的有效稀釋倍數(shù)分別為25倍、50倍、100倍、200倍。

　　2.5取注射用鹿瓜多肽樣品,用BET水稀釋成1:25、1:50、1:100、1:200、倍系列濃度,記此系列溶液為Sw;另制備同樣稀釋倍數(shù)并含有2λ濃度內(nèi)毒素系列的樣品溶液,記此系列溶液為SE。

　　選擇兩個(gè)鱟試劑生產(chǎn)企業(yè),靈敏度均為λ=0.25EU/ml的TAL,分別與SW和SE兩個(gè)系列稀釋液反應(yīng),依次記為NPC和PPC,正式進(jìn)行注射用鹿瓜多肽干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn),試驗(yàn)重復(fù)2管,另分別設(shè)PC、NC管各2支,分別做陽性和陰性對照。

　　結(jié)果見表1。

　　對另一廠家3個(gè)批號(hào)的注射用鹿瓜多肽的干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn),都得出以上相同結(jié)論,因此可初步確定注射用鹿瓜多肽的最小不干擾稀釋倍數(shù)為25倍,可在此濃度下進(jìn)行干擾驗(yàn)證試驗(yàn)。

　　2.6干擾試驗(yàn)從預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可知, 注射用鹿瓜多肽在稀釋到50倍時(shí)可排除干擾,以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水及注射用鹿瓜多肽50倍的稀釋液,分別將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品配成濃度為2.0λb,1.0λb,0.5λb,0.25λb4個(gè)濃度的溶液(分別稱X系列和Y系列),同時(shí)兩個(gè)系列分別以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和注射用鹿瓜多肽50倍的稀釋液作陰性對照(NC)。

　　以兩個(gè)不同企業(yè),靈敏度均為0.25EU/ml的TAL,進(jìn)行干擾試驗(yàn)[2]。

　　結(jié)果見表2。

　　結(jié)果表明注射用鹿瓜多肽稀釋50倍后,消除了對鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)的抑制作用。

　　供試品的λ值均在0.5～2.0λb(0.125～0.5 EU/ml)

　　因此,在進(jìn)行該品種的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查時(shí)可選用的鱟試劑最大的靈敏度:λ= 0.125EU/ml。

　　同時(shí),用以上方法和試劑對注射用鹿瓜多肽100倍的稀釋液進(jìn)行干擾驗(yàn)證,其結(jié)果為Et=Es=λb,證明無干擾。

　　2.7 注射用鹿瓜多細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 按《中國藥典》2005年版二部附錄XIE中細(xì)菌內(nèi)素素檢查法,使用二批不同廠家的鱟試劑分別對樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,并同時(shí)設(shè)立樣品的自身對照管,結(jié)果見表3

　　3討論

　　注射用鹿瓜多肽對鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)無干擾作用。

　　干擾試驗(yàn)結(jié)果證實(shí), 注射用鹿瓜多肽在稀釋倍數(shù)≥25倍時(shí),對靈敏度在0.5～2.0λb(0.125～0.5 EU/ml)的鱟試劑無干擾作用,因此注射用鹿瓜多肽用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法是可行的。

　　按細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[2]進(jìn)行檢查,每1mg本品中含細(xì)菌內(nèi)毒素量應(yīng)小于12.5EU/mg。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1] 國家藥典委員會(huì).中國藥典2005版二部附錄ⅪD・北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.85.

　　[2] 國家藥典委員會(huì).中國藥典2005版二部附錄ⅪE・北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.85.

　　[3] 劉婉.注射用更昔洛韋細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國實(shí)用醫(yī)藥2008, 3(27): 69-71.

　　[4] 張?jiān)破?陳啟釗. 注射用血栓通細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的探討[J]. 中國藥師, 2010,13(3).

　　注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法【2】

　　【摘要】 目的 研究用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法替代鱟試劑法。

　　方法 對藥廠生產(chǎn)的注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉采用試劑檢查細(xì)菌內(nèi)毒素。

　　結(jié)果 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法比鱟試劑動(dòng)物檢查的方法更安全、靈敏。

　　結(jié)論 用該方法使結(jié)果更安全、準(zhǔn)確。

　　【關(guān)鍵詞】 格拉斯瓊氯化鈉;細(xì)菌內(nèi)毒素;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

　　1 一般資料

　　注射用鹽酸格拉司瓊氯化鈉， (新疆制藥廠生產(chǎn)， 批號(hào)：06120621、06120631、06121641)， (熱源檢查均符合規(guī)定)， 規(guī)格：50ml/瓶 ：注射用鹽酸格拉司瓊(以 C18H24N4O計(jì))3mg與氯化鈉。

　　鱟試劑(湛江安度斯生物有限公司， 批號(hào)： 06120521、06120621、06120631， 規(guī)格：0.1ml/支， 靈敏度：0.25EU/ml。

　　)細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品：由中國藥品生物制品檢定所， 批號(hào)：2006-10， 效價(jià)：160EU/A， 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(BET水)：湛江博康海洋生物有限公司生產(chǎn)， 批號(hào)：0603182， 規(guī)格50ml/瓶。

　　2 方法與結(jié)果

　　2. 1 鱟試劑靈敏度復(fù)核， 按《中國藥典》[1]2005年版細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的要求：結(jié)果，鱟試劑的靈敏度復(fù)核規(guī)定均在(0.5～2.0)λ之間符合規(guī)定。

　　表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果。

　　由表 1 可見3批鱟試劑均在(0.5～2.0)λ之間， 由此鱟試劑靈敏度均符合規(guī)定， 可見于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查， 標(biāo)示靈敏度λ為該批鱟試劑的靈敏度。

　　2. 2 供試品內(nèi)毒素限值(L)的確定， 《中國藥典》[1]2005版二部附錄采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法， 根據(jù)公式 L=K/M 確定供試品的內(nèi)毒素限值。

　　式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素的限值， 以EU/ml考慮到合并用藥因素， 供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值 L為0.25EU/ml。

　　2. 3 供試品最大有效稀釋倍數(shù)的確定， 采用公式 MVD=CL/λ確定供試品最大不干擾濃度。

　　根據(jù)公式MVD=CL/λ， 選用市售鱟試劑靈敏度標(biāo)示值為0.25 EU/ml。

　　來確定供試品注射用格拉斯瓊氯化鈉的最大不干擾濃度MVD=CL/λ=2 。

　　2. 4 干擾預(yù)試驗(yàn)， 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水對供試品2倍的稀釋， 取供試品(原液)及1：2稀釋的供試品溶液， 將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品逐一稀釋， 稀釋的倍數(shù)是1倍、2倍、4倍、8倍、把結(jié)果設(shè)立陰性和陽性的對照， 并且做陰、陽性對照(各2管)， 表明原液對鱟試劑有干擾， 供試品稀釋后對鱟試劑試驗(yàn)無任何干擾。

　　見表2。

　　2. 5 供試品干擾試驗(yàn)，用兩個(gè)廠家的靈敏度為0.25EU/mg， 制成細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品分別含內(nèi)毒素(2.0、 1.0、 0.5、0.25)λ濃度的溶液。

　　分別平行做4管， 并且做細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水和供試品的溶液為(1：2)分別做2管比較， 并計(jì)算以樣品稀釋液配制的細(xì)菌內(nèi)毒素溶液反應(yīng)到終點(diǎn)濃度幾何均值(Et)觀察結(jié)果， 表明ES在(0.5～2.0)λ之間， Et在(0.5 s～2.0) Es之間， 表明該注射液的2倍稀釋液對鱟試劑試驗(yàn)沒有產(chǎn)生干擾作用。

　　供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素取三批注射用鹽酸格拉斯瓊依次加入細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水制成每1ml中含格拉斯瓊30μg的溶液， 按《中國藥典》2005年版檢查法進(jìn)檢查， 每1ml中含內(nèi)毒素的量應(yīng)(﹥0.25EU)。

　　見表3。

　　表 3供試品干擾試驗(yàn)結(jié)果。

　　3 討論

　　本文主要通過干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)， 取3批注射用鹽酸格拉斯瓊氯化鈉溶液2倍稀釋液對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾。

　　用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法是合理的， 表明用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法控制內(nèi)毒素的方法是可行的。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1] 國家要點(diǎn)委員.中華人民共和國藥典(二部).2005年版、北京：化學(xué)工業(yè)出版社， 2005.

　　注射用葛根素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法可行性【3】

　　[摘要] 目的:對注射用葛根素進(jìn)行凝膠法干擾試驗(yàn),建立注射用葛根素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查試驗(yàn)方法。

　　方法:采用《中國藥典》2005年版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。

　　結(jié)果:注射用葛根素稀釋至濃度1.5 mg/ml時(shí)對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無干擾作用。

　　結(jié)論:使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查注射用葛根素中的細(xì)菌內(nèi)毒素是可行的,可用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔熱原檢查法。

　　[關(guān)鍵詞] 注射用葛根素;細(xì)菌內(nèi)毒素;凝膠法;干擾試驗(yàn)

　　葛根素是從豆科植物野葛干燥根中提取的單體,為異黃酮類化合物,臨床及基礎(chǔ)研究證明,該藥具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈和腦血管、降低心肌耗氧量、改善心肌收縮功能、促進(jìn)血液循環(huán)等藥理作用[1-2],臨床上現(xiàn)已用于治療心腦血管及外周血管疾病[3-4]。

　　該品種國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-388-1)-2003Z進(jìn)行熱原檢查[5],未進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

　　為考察該品種是否可以用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法來代替熱原檢查法,本文參照《中國藥典》2005年版二部附錄收載的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法對注射用葛根素進(jìn)行了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查研究。

　　1 儀器與試藥

　　注射用葛根素(批號(hào):08020301,規(guī)格:0.2 g/瓶,華北制藥集團(tuán)制劑有限公司;批號(hào):20061222,200712131,規(guī)格:100 mg/瓶,北京賽生藥業(yè)有限公司;批號(hào):20060522,200711303,規(guī)格:50 mg/瓶,北京賽生藥業(yè)有限公司;批號(hào):07102801,規(guī)格:0.4 g/瓶,山東瑞陽制藥有限公司;批號(hào):07121101,規(guī)格:0.2 g/瓶,山東瑞陽制藥有限公司;批號(hào):07100401, 規(guī)格:0.1 g/瓶,山東瑞陽制藥有限公司;批號(hào):07091602,規(guī)格:50 mg/瓶,山東瑞陽制藥有限公司);鱟試劑(批號(hào):0807022,規(guī)格:0.1 ml/支,標(biāo)示靈敏度:0.25 EU/ml,湛江安度斯生物有限公司;批號(hào):080506, 081012,規(guī)格:0.1 ml/支,標(biāo)示靈敏度:0.25 EU/ml,廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司鱟試劑);細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):150601-200860,規(guī)格:160 EU/支,中國藥品生物制品檢定所);細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水(批號(hào):0801180,規(guī)格:50 ml/支,湛江安度斯生物有限公司);漩渦振蕩器(IKA-MS-1);恒溫水浴箱(德國Julabo 19A)。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 鱟試劑標(biāo)示靈敏度的復(fù)核[6-7]

　　根據(jù)鱟試劑靈敏度的標(biāo)示值,將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水溶解,在漩渦振蕩器上混勻15 min,然后制成2.00λ、1.00λ、0.50λ和0.25λ 4個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液,按《中國藥典》2005年版二部附錄的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法規(guī)定,對湛江安度斯生物有限公司和廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司兩個(gè)廠家的鱟試劑進(jìn)行靈敏度的復(fù)核,鱟試劑靈敏度的測定值(λc)=lg-1(∑X/4),式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度的對數(shù)值(lg),結(jié)果見表1。

　　3批鱟試劑靈敏度分別為0.25 EU/ml、0.25 EU/ml和0.42 EU/ml,均在0.5 λ～2.0 λ范圍之間,表明3批鱟試劑靈敏度均符合規(guī)定,可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

　　表 1 鱟試劑靈敏度復(fù)核結(jié)果

　　Tab.1 The results of tachypleus amebocyte lysate sensitivity test

　　2.2 注射用葛根素的細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)的確定[6-7]

　　按《中國藥典》2005年版二部中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的規(guī)定確定細(xì)菌內(nèi)毒素限值。

　　根據(jù)公式L=K/M,式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值,K為按規(guī)定的給藥途徑,人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量,注射劑K=5 EU/(kg・h),M為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量,人均體重按60 kg計(jì)算,注射時(shí)間若不足1 h,按1 h計(jì)算。

　　從注射用葛根素的產(chǎn)品使用說明書可知本品的最大用藥劑量為600 mg,人均體重以60 kg計(jì),滴注時(shí)間按1 h計(jì)算, 則M=600 mg/60 kg・h=10 mg/(kg・h),L= K/M =[5 EU/(kg・h)]/[10 mg/(kg・h)]=0.5 EU/mg。

　　本品為心血管藥、兒童老人用藥,根據(jù)《注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則(修訂稿)》的要求安全系數(shù)定為3,本品內(nèi)毒素最終確定限值為L=0.17 EU/mg。

　　2.3 注射用葛根素的干擾預(yù)試驗(yàn)稀釋倍數(shù)的確定[8-9]

　　目前用于藥品檢驗(yàn)的市售鱟試劑靈敏度(λ)一般在0.50～0.03 EU/mg范圍內(nèi),最小有效稀釋濃度c=λ/L,L=0.17 EU/mg,故注射用葛根素進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測時(shí),0.50～0.03 EU/mg的鱟試劑相對應(yīng)的最小有效稀釋濃度為3.00、1.50、0.75、0.38、0.18 mg/ml。

　　2.4 干擾預(yù)試驗(yàn)試驗(yàn)[8-9]

　　取3批注射用葛根素(批號(hào):08020301,規(guī)格:0.2 g/瓶;批號(hào):200711303,規(guī)格:50 mg/瓶;批號(hào):07121101,規(guī)格:0.2 g/瓶)各1瓶,分別加BET水適量溶解,制成50 mg/ml的供試品原液,用BET水將供試品原液進(jìn)行倍比稀釋,制得3.00、1.50、0.75、0.38、0.18 mg/ml共5個(gè)濃度梯度的溶液,將此系列濃度溶液標(biāo)記為供試品管(NPC系列),用上述稀釋液作為溶劑,溶解并稀釋細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品,制得每個(gè)稀釋度中細(xì)菌內(nèi)毒素含量均為2 λ(0.5 EU/ml)的注射用葛根素溶液,標(biāo)記此系列溶液為供試品陽性對照管(PPC系列)。

　　取靈敏度為0.25 EU/ml的湛江安度斯生物有限公司和廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司兩個(gè)不同廠家的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn),每一稀釋度做2管,同時(shí)按常規(guī)分別設(shè)細(xì)菌內(nèi)毒素陽性對照(PC)和檢查用水陰性對照(NC)各2管,結(jié)果見表2。

　　表 2 注射用葛根素干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

　　Tab.2 The results of prerliminary interference test of

　　Puerarin for Injection

　　由表2結(jié)果可知,所用的3批注射用葛根素稀釋到3.0 mg/ml濃度的溶液時(shí),有2批樣品對湛江安度斯生物有限公司的鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)有干擾作用,稀釋到1.5 mg/ml或以下濃度的溶液時(shí),對兩個(gè)廠家的鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素反應(yīng)無增強(qiáng)或抑制的干擾作用。

　　2.5 干擾試驗(yàn)[6-7]

　　用兩個(gè)廠家的鱟試劑(靈敏度為0.25 EU/ml),按《中國藥典》2005年版二部附錄的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行試驗(yàn),測定用BET水制成的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Es)和用供試品稀釋液制成的內(nèi)毒素溶液的反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Et)。

　　取3批注射用葛根素(批號(hào):08020301,200711303,07121101)各1瓶,分別加BET水適量溶解,制成50 mg/ml的供試品原液,再用BET水稀釋制成濃度為1.5 mg/ml的供試品稀釋液,用BET水和供試品稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成2.00 λ、1.00 λ、0.50 λ、0.25 λ濃度的BET水系列細(xì)菌內(nèi)毒素溶液和供試品稀釋液系列細(xì)菌內(nèi)毒素溶液,每一稀釋濃度重復(fù)4管,同時(shí)用上述供試品稀釋液和BET水各做2管陰性對照管,按公式計(jì)算BET水和供試品稀釋液反應(yīng)終點(diǎn)濃度的幾何平均值(Es和Et),Es=lg-1(∑Xs/4),Et=lg-1(∑Xt/4),結(jié)果見表3。

　　表 3 注射用葛根素的正式干擾試驗(yàn)結(jié)果

　　Tab.3 The results of interference test of Puerarin for Injection

　　由表3結(jié)果可知,2 λ管均為陽性,0.50 λ、0.25 λ管均為陰性,對于λ=0.25 EU/ml的2組鱟試劑的Es分別為0.25 EU/ml、0.35 EU/ml,Es均在0.5λ～2.0 λ范圍內(nèi),3批注射用葛根素測得的Et均在0.5 λ～2.0 λ范圍內(nèi),Et和Es的比值在0.5～2.0范圍內(nèi),說明注射用葛根素在1.5 mg/ml或以下濃度的溶液對兩個(gè)不同廠家的鱟試劑與內(nèi)毒素的反應(yīng)無增強(qiáng)或抑制的干擾作用,符合《中國藥典》2005年版二部對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查有效性的規(guī)定,因此可以確定注射用葛根素的最大無干擾濃度為1.5 mg/ml。

　　2.6 注射用葛根素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

　　取9批注射用葛根素樣品,分別根據(jù)“2.5”項(xiàng)下方法制成供試品稀釋液,使用λ=0.25 EU/ml的兩個(gè)廠家的鱟試劑進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,并用此稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為2 λ的溶液,作為供試品的陽性對照,另外以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水建立陽性對照和陰性對照。

　　按《中國藥典》2005年版二部細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢查,結(jié)果見表4。

　　由表4結(jié)果可知,陰性對照管(NC)均為陰性,供試品陽性對照管(PPC)和陽性對照管(PC)均為陽性,實(shí)驗(yàn)有效;供試品管(NPC)均為陰性,表明樣品中未檢出細(xì)菌內(nèi)毒素,9批注射用葛根素的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查均符合規(guī)定。

　　3 結(jié)論

　　3.1 無干擾濃度確定

　　干擾試驗(yàn)?zāi)康氖窃u價(jià)樣品濃度對鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應(yīng)的干擾程度及干擾性質(zhì),初步篩選出對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查無干擾的樣品濃度范圍。

　　本品通過將注射用葛根素稀釋至1.5 mg/ml或以下濃度,消除對鱟試劑凝集反應(yīng)的干擾。

　　3.2 鱟試劑的影響

　　不同廠家的鱟試劑由于生產(chǎn)工藝、質(zhì)量參數(shù)等方面有一定差異,其抗干擾能力存在差異。

　　因此,本實(shí)驗(yàn)采用2個(gè)不同廠家的鱟試劑對3個(gè)批號(hào)的樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

　　從正式干擾試驗(yàn)結(jié)果可見,樣品稀釋至1.5 mg/ml濃度時(shí),Es或Et均在0.5 λ～2.0 λ范圍之內(nèi),可認(rèn)為注射用葛根素在該濃度下不干擾細(xì)胞內(nèi)毒素檢查。

　　3.3 檢查結(jié)果

　　用兩個(gè)廠家鱟試劑與9批樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查,樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量均在0.17 EU/mg限值以下。

　　因此,注射用葛根素采用限值0.17 EU/mg進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法是可行的。

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