鬼針草成分的分離和鑒定

時(shí)間：2022-10-01 04:58:23 藥學(xué)畢業(yè)論文我要投稿

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鬼針草成分的分離和鑒定

　　下面是一篇小編精心準(zhǔn)備的鬼針草成分的分離和鑒定的論文，歡迎各位藥學(xué)專業(yè)畢業(yè)的同學(xué)閱讀哦!

　　摘要：目的研究鬼針草的化學(xué)成分。方法采用乙醇提取，硅膠柱、聚酰胺柱層析分離純化，波譜分析鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果從鬼針草中得到5個(gè)化合物：異槲皮苷(Ⅰ)，異奧卡寧-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅱ)，海生菊苷(Ⅲ)，槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷(Ⅳ)，D-甘露醇(Ⅴ)。結(jié)論5個(gè)化合物中的Ⅳ、Ⅴ是首次從本屬植物中得到的。

　　關(guān)鍵詞：鬼針草;異槲皮苷;異奧卡寧-7-O-β-D-葡糖苷;海生菊苷;槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷;D-甘露醇

　　鬼針草(Bidens bipinnata L.)是菊科鬼針草屬植物，民間藥用歷史悠久，治療作用廣泛，療效確切，藥材資源豐富。藥理研究表明，鬼針草具有降血糖、抑制醛糖還原酶(aldose reductase)、抗炎、抗腫瘤等作用并對(duì)心血管系統(tǒng)有作用[1]。其中，乙酸乙酯與正丁醇提取物是其抑制醛糖還原酶的有效部位，黃酮類成分是其主要的有效成分。為了查明其有效成分，為綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)，我們研究了鬼針草乙酸乙酯提取物與正丁醇提取物的化學(xué)成分。

　　1儀器和試劑

　　U-3010紫外分光光度計(jì)，超導(dǎo)300 M核磁共振波譜儀(TMS為內(nèi)標(biāo))，API 4000型質(zhì)譜儀。薄層層析用硅膠系青島海洋化工公司產(chǎn)，柱層析用硅膠系青島化學(xué)試劑廠產(chǎn)，聚酰胺薄膜系上海試劑四廠產(chǎn)，柱層析用聚酰胺(100-200目)系臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠產(chǎn)，紫外所用色譜純甲醇系天津四友公司產(chǎn)，診斷試劑自制，其余所用試劑均為分析純。鬼針草藥材采自濟(jì)南近郊，經(jīng)本校徐凌川老師鑒別，藥材樣品保存于本實(shí)驗(yàn)室。

　　2提取與分離

　　鬼針草藥材10 kg，用8倍量80 %乙醇回流提取3次，合并提取液，濃縮，除去葉綠素。依次用水飽和石油醚、乙酸乙酯、正丁醇提取上清液，回收溶劑后得到乙酸乙酯提取物93.5 g，正丁醇提取物122 g。乙酸乙酯提取物硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得到2個(gè)部位：氯仿-甲醇416～452部分與氯仿-甲醇453～548部分。氯仿-甲醇416～452部分經(jīng)聚酰胺柱層析得黃色固體粉末，再經(jīng)聚酰胺柱層析，乙酸乙酯-甲醇洗脫，得化合物Ⅰ(15 mg);氯仿-甲醇453～548部分經(jīng)聚酰胺柱反復(fù)層析，分別用水醇系統(tǒng)、乙酸乙酯-甲醇系統(tǒng)洗脫得化合物Ⅱ(32 mg)，Ⅲ(10.2 mg)，Ⅳ(26 mg)。正丁醇提取物硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，氯仿-甲醇422～455部分析出無色雪花狀結(jié)晶，經(jīng)丙酮-水重結(jié)晶，得化合物Ⅴ(180 mg)。

　　3結(jié)構(gòu)鑒定

　　化合物Ⅰ：黃色無定形粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 250～252 ℃，Molish反應(yīng)陽性，HCl-Mg粉反應(yīng)陽性。其1H-NMR(DMSO-d6)譜中δ: 12.64(1H，s)示黃酮母核存在5-OH;芳香區(qū) 7.57(2 H，d，J=9 Hz，H-2’，6’)，6.83(1 H，d，J=8.7 Hz，H-5’)表示B環(huán)為3’4’二取代;6.38(1 H，s，H-8)，6.19(1 H，s，H-6)表示A環(huán)為5,7二取代，5.46(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)為糖的端基質(zhì)子信號(hào)，其偶合常數(shù)(J=6.9 Hz)表明苷鍵為β構(gòu)型。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：156.34(C-2)，133.29(C-3)，177.43(C-4)，161.25(C-5)，98.72(C-6)，164.70(C-7)，93.53(C-8)，156.14(C-9)，103.93(C-10)，121.15(C-1’)，115.22(C-2’)，144.84(C-3’)，148.50(C-4’)，116.21(C-5’)，121.62(C-6’)，糖部分：100.83(C-1”)，74.10(C-2”)，76.50(C-3”)，69.93(C-4”)，77.62(C-5”)，60.98(C-6”)。綜合以上數(shù)據(jù)，其1H-NMR與13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的異槲皮苷數(shù)據(jù)[2]對(duì)照，二者基本一致，確定化合物Ⅰ為異槲皮苷，即槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷。

　　化合物Ⅱ：土白色粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 242～245 ℃，Molish反應(yīng)陽性，HCl-Mg粉反應(yīng)陽性。其1H-NMR(DMSO-d6)譜中，δ：5.38(1 H，dd，J=12 Hz，J=3 Hz，H-2)，2.65(1 H，dd，J=17.0 Hz，J=3 Hz，H-3a)，3.11(1 H，dd，J=16.8 Hz，J=3 Hz，H-3b)，為二氫黃酮苷元C環(huán)上的1個(gè)2位的質(zhì)子和2個(gè)3位的質(zhì)子。7.22(1 H，d，J=9 Hz，H-5)，6.85(1H，d，J=8.7 Hz，H-6)，為二氫黃酮類化合物A環(huán)上的質(zhì)子，其偶合常數(shù)可知A環(huán)為鄰位取代。6.91(1 H，s，H-2’)，6.76(1 H，s，H-6’)，6.74(1 H，s，H-5’)，為B環(huán)上二取代后的質(zhì)子。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ：79.29(C-2)，43.45(C-3)，191.21(C-4)，118.06(C-5)，108.90(C-6)，150.52(C-7)，135.11(C-8)，150.75(C-9)，116.55(C-10)，129.87(C-1’)，114.52(C-2’)，145.66(C-3’)，145.17(C-4’)，115.28(C-5’)，116.55(C-6’)，糖部分：101.44(C-1”)73.19(C-2”)，75.69(C-3”)，69.65(C-4”)，77.27(C-5”)，60.61(C-6”)。將其1H-NMR與13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的異奧卡寧-7-O-β-D-葡糖苷數(shù)據(jù)[3]對(duì)照，二者基本一致，確定化合物Ⅱ?yàn)楫悐W卡寧-7-O-β-D-葡糖苷。

　　化合物Ⅲ：橙黃色粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 202～205 ℃，Molish反應(yīng)陽性，遇堿變紅色，HCl-Mg粉反應(yīng)陰性。其1H-NMR譜中，芳香區(qū)5個(gè)氫的化學(xué)位移與偶合常數(shù)提示A環(huán)5，7位二取代，B環(huán)3’，4’二取代。1H-NMR(300 MHz，DMSO-d6)譜中 δ：7.49(1 H，s，H-2’)，7.32(1 H，d，J=8.4 Hz，H-6’)，7.15(1H，d，J=8.1 Hz，H-4)，7.04(1 H，d，J=8.4 Hz，H-5)，6.84(1 H，d，J=8.4 Hz，H-5’)，6.69(1 H，s，H-10)，4.91(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)，3.15-3.73(糖上質(zhì)子)。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6) δ：145.68(C-2)，182.57(C-3)，113.681(C-4)，112.13(C-5)，154.30(C-6)，133.36(C-7)，152.49(C-8)，117.14(C-9)，112.88(C-10)，123.26(C-1’)，118.28(C-2’)，145.48(C-3’)，148.55(C-4’)，116.05(C-5’)，124.94(C-6’)，糖部分：101.72(C-1”)，73.26(C-2”)，75.82(C-3”)，69.64(C-4”)，77.34(C-5”)，60.63(C-6”)。將其1H-NMR與13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的海生菊苷數(shù)據(jù)[4]對(duì)照，二者基本一致，確定化合物Ⅲ為海生菊苷，即6-O-β-D-吡喃葡糖基-7，3’，4’-三羥基橙酮。

　　化合物Ⅳ：黃色顆粒狀粉末(乙酸乙酯-甲醇)，mp 245～247 ℃。Molish反應(yīng)陽性，HCl-Mg粉反應(yīng)陽性。ESI-MS m/z: 465(M+1)+為分子離子峰，301為掉一分子葡萄糖的碎片峰。1H-NMR(DMSO-d6)譜中δ：12.52(1H，s)表示黃酮母核存在5-OH;δ7.71(1 H，S，H-2’)，7.54(1 H，d，J=8.4 Hz，H-6’)，6.88(1 H，d，J=8.7 Hz，H-5’)表示B環(huán)為3’,4’二取代，較高場的δ 6.76(1 H，s，H-8)，6.41(1 H，s，H-6)表示A環(huán)為5,7二取代;δ 5.07(1 H，d，J=6.9 Hz，H-1”)為糖的端基質(zhì)子信號(hào)，其偶合常數(shù)(J=6.9 Hz)說明苷鍵是β構(gòu)型。13C-NMR(300 MHz，DMSO-d6) δ：147.58(C-2)，136.13(C-3)，176.04(C-4)，160.38(C-5)，98.75(C-6)，162.69(C-7)，94.24(C-8)，155.74(C-9)，104.67(C-10)，121.80(C-1’)，115.60(C-2’)，145.10(C-3’)，147.97(C-4’)，115.40(C-5’)，120.05(C-6’)，糖部分：99.84(C-1”)，73.13(C-2”)，76.41(C-3”)，69.52(C-4”)，77.16(C-5”)，60.61(C-6”)。綜合以上數(shù)據(jù)，化合物Ⅳ的1H-NMR與 13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷數(shù)據(jù)[2,5]對(duì)照，二者基本一致，確定化合物Ⅳ為槲皮素-7-O-β-D-葡糖苷。

　　化合物Ⅴ：無色針晶(丙酮-水)，mp 166.5～167.5 ℃，Molish反應(yīng)陽性，微甜，易溶于水，難溶于低極性有機(jī)溶劑。IR(KBr)cm-1：3 253(OH，br)，2 935(CH2對(duì)稱伸縮振動(dòng))，1 400(CH2對(duì)稱彎曲振動(dòng))，1 026(C-O伸縮振動(dòng))，933(-OH面外彎曲振動(dòng))。由1H-NMR(DMSO-d6)譜數(shù)據(jù)可知，處于較低場的δ：4.41(2 H，d，J=5.1 Hz，C2,5-O-H)，4.32(2 H，t，J=5.4 Hz，C1,6-O-H)，4.13(2 H，d，J=7.2 Hz，C3,4-O-H)，分別是醇羥基的氫質(zhì)子，與碳上所連質(zhì)子明顯偶合，而處于較高場3.3～3.6處的質(zhì)子峰，推測為其余氫質(zhì)子的堆積峰，對(duì)照化合物Ⅳ氫譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道D-甘露醇的氫譜數(shù)據(jù)[6]基本一致。結(jié)合13C-NMR(DMSO-d6)譜可知分子結(jié)構(gòu)具有對(duì)稱性，13C-NMR δ：71.31(2C，C-3，C-4)，69.66(2C，C-2，C-5)，63.90(2C，C-1，C-6)，與文獻(xiàn)報(bào)道D-甘露醇13C-NMR數(shù)據(jù)[7]基本一致，綜合上述數(shù)據(jù)，確定化合物Ⅴ為D-甘露醇。

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