煙酰胺的含量測定方法

　　煙酰胺的含量測定方法

　　摘　要：本文通過外標(biāo)法用來檢測煙酰胺含量值,并且在此條件下能夠檢測煙酰胺的最后的含量值是比較可靠的,基于此煙酰胺和煙酸得可以更好的分離,使之具有準(zhǔn)確可靠,專屬性強(qiáng),穩(wěn)定簡便等系列特點(diǎn)。

　　關(guān)鍵詞：外標(biāo)法　煙酰胺　含量值

　　一、儀器與材料

　　1.儀器

　　Kromasil C18色譜柱，Agilent LC1100高效液相色譜儀,; Hypersil C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm); ,CP225D電子天平,SHIMADZU UV2450紫外-可見分光光度計(jì)。

　　2.材料

　　煙酰胺對照品;煙酰胺;磷酸二氫鉀,分甲醇,乙腈,色譜純。

　　二、方法與結(jié)果

　　1.色譜條件

　　采用Agilent 110型高效液相色譜儀,Kro-masil C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相:磷酸二氫鉀溶液(0.01mol.L-1)-水-甲醇-乙腈(1/79/15/5);流速0.8 mL.min-1;柱溫:20.0℃檢測波長:262nm;進(jìn)樣量:10μL。柱溫:室溫。

　　2.測定方法

　　量測定:精密稱取本品約10mg,置100mL量瓶中,加水適量,振搖使溶解,用水稀釋至刻度,搖勻,做為供試品溶液(100μg.L-1),精密量取10μL,照2.1項(xiàng)下的色譜條件,注入液相色譜儀,另取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋制成含煙酰胺100μg.L-1的對照品溶液,同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。

　　3.線性試驗(yàn)

　　3.1精密稱取煙酰胺對照品0.04055g置100mL量瓶中,加水溶解并稀釋成含煙酰胺405.5μg.mL-1的濃對照品溶液,并稀釋成2.028～405.5μg.mL-1的6個(gè)濃度的溶液(精密吸取濃對照品溶液1mL,分別置200mL、100mL、50mL、25mL量瓶中;精密吸取3mL、5mL,分別置25mL量瓶中,分別加水稀釋至刻度),另取濃對照品溶液,形成7個(gè)濃度的溶液,照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL ,以峰面積Y對濃度X(μg.L-1)作線性回歸,結(jié)果:在2.028～405.5μg.mL-1濃度范圍內(nèi),測得的峰面積與與煙酰胺溶液的濃度呈良好的線性關(guān)系:Y=19.76X+3.565,r=0.9999。

　　即采用此法對煙酰胺進(jìn)行定量分析是可行的。

　　4.定量限、最小檢出量試驗(yàn)

　　精密稱取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋成含煙酰胺2.028μg.mL-1的的溶液,照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL,結(jié)果S/N=10.6,定量限為20.28ng。精密稱取煙酰胺對照品適量,加水溶解并稀釋成含煙酰胺0.477μg.mL-1的溶液,照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL,結(jié)果S/N=2.5,最小檢出量為4.77ng。

　　5.系統(tǒng)精密度、重復(fù)性及溶液的穩(wěn)定性試驗(yàn)

　　精密量取2.2.1項(xiàng)下的對照品溶液10μL,照2.1項(xiàng)下的色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣6次,以峰面積計(jì)算,結(jié)果:RSD為0.1%。取批號為080805的樣品,照2.2.1項(xiàng)下的方法配制6份供試品溶液,照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL,以外標(biāo)法計(jì)算,分別為標(biāo)示量的99.4%, 99.7%, 99.5%, 99.5%,99.8%,100.5%,RSD為0.3%。取2.6重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的其中1份供試品溶液,室溫下放置,分別于0,2,4,8,12,24,30h測定,30h內(nèi)主成分峰面積的RSD分別為0.2%,表明供試品溶液在30h內(nèi)基本穩(wěn)定。

　　6.加樣回收率試驗(yàn)

　　精密量取量按2.2.1項(xiàng)下制備的對照品溶液1,5,10mL分別置25mL量瓶中,分別精密量取按2.2.1項(xiàng)下制備的供試品溶液10mL加入其中,加水稀釋至刻度。照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL,以外標(biāo)法峰面積計(jì)算。結(jié)果底、中、高3個(gè)濃度的回收率分別為100.1,101.7%,103.2%,RSD為0.2%,0.2%,0.5%。平均回收率(n=9)為101.7%。

　　7.系統(tǒng)耐用性試驗(yàn)

　　保持其他色譜條件不變,只改變下述色譜條件:①流速改為1.0mL.min-1,柱溫不變(20℃);②柱溫設(shè)為30℃,流速為0.8mL.min-1;③更換其他品牌相同類型色譜柱。取2.1項(xiàng)下對照品溶液,測定主成分峰的理論板數(shù)及相鄰有關(guān)物質(zhì)峰與主成分峰的相對保留時(shí)間、理論板數(shù)。結(jié)果表明,在改變上述色譜條件的情況下,相鄰有關(guān)物質(zhì)峰與主成分峰的相對保留時(shí)間較穩(wěn)定，其值約為0.8，理論板數(shù)均大于8000，分離度均大于7.0。

　　8.樣品測定

　　精密稱取批號為080805的樣品2份,照2.2.1項(xiàng)下的方法制備供試品溶液;另精密稱取煙酰胺對照品約10mg置100量瓶中,加水溶解并稀釋制成對照品溶液,照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣10μL,以外標(biāo)法計(jì)算,測得含量為標(biāo)示量的99.9%,RSD為0.2%。

　　三、討論

　　1.檢測波長的選擇

　　精密稱取煙酰胺對照品適量,分別用水和流動相溶解并稀釋成20μg.L-1的溶液,分別掃描,兩者的最大吸收波長均為262nm,所以選擇262nm作為本法的測定波長。

　　2.中間體的分離效果驗(yàn)證

　　從合成工藝看,煙酰胺是由β-甲基吡啶,經(jīng)空氣氧化生成煙酸,與氨水作用生成β-吡啶甲酸銨,最后加熱脫水生成。從藥理作用看,煙酰胺作用與煙酸類似,較煙酸易于耐受;煙酸有擴(kuò)張血管作用,煙酰胺無擴(kuò)張血管作用。若能分離檢測出煙酰胺中含有的煙酸,對控制煙酰胺藥品質(zhì)量具有意義。

　　所以選擇煙酰胺有關(guān)物質(zhì)中可能存在的、合成工藝中重要的中間體的煙酸,作為代表性中間體,驗(yàn)證本色譜條件對煙酰胺中可能存在的中間體分離效果,即稱取煙酸工作對照品與煙酰胺對照品適量,加水溶解制成分別含煙酸和煙酰胺20μg.mL-1混合溶液,按照2.1的色譜條件進(jìn)樣,結(jié)果分離良好,煙酸與煙酰胺分離度大于10.0。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1]國家藥典委員會編中國藥典[S].2011版,二部,632.

　　[2]李小燕,劉淑英.HPLC法測定煙酰胺的含量[J].中國藥事,2010,17(3):405.

　　[3]李正化.藥物化學(xué)[S].第二版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2010 .

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