- 相關(guān)推薦
聚酰胺分離純化薇菜黃酮
聚酰胺分離純化薇菜黃酮
摘要：以薇菜為原料提取黃酮類化合物，以上樣量、洗脫流速、乙醇濃度為考察對(duì)象，采用聚酰胺柱層析法優(yōu)化分離純化工藝條件。
結(jié)果表明：最佳分離工藝參數(shù)為上樣量3mL(濃度0.749mg/mL)、70%的乙醇、200mL/h的流速洗脫，譜峰較窄，洗脫峰的黃酮含量達(dá)到14.45%。
此法可較好地分離純化薇菜黃酮類化合物，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。
關(guān)鍵詞：薇菜;黃酮;聚酰胺樹脂;分離純化
薇菜屬蕨類植物門(Pterdophta)、紫萁屬(Osmunda)多年生蕨類植物。
以初生嫩葉干制后食用，具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖、黃酮、脂肪、纖維素、礦質(zhì)元素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，深受消費(fèi)者青睞。
薇菜富含黃酮類化合物，據(jù)研究，黃酮類化合物有抗癌、抗衰老、治療骨病和骨質(zhì)疏松等功效，具有提高記憶力、抗過敏、活血化瘀、利膽及肝臟保護(hù)作用H。
麥葉中提取的黃酮類化合物對(duì)超氧陰離子自由基(02・)、羥基自由基(・OH)有清除作用，能抗氧化。
目前，關(guān)于薇菜黃酮類化合物的分離純化工藝學(xué)研究方面的報(bào)道少見，尚不成熟。
本研究采取超聲波萃取法，對(duì)薇菜中黃酮類化合物進(jìn)行提取工藝及用聚酰胺樹脂分離純化工藝的研究，尋求最佳的提取分離純化條件，以推進(jìn)植物資源的有效開發(fā)利用。
1材料與方法
1.1材料
1.1.1試驗(yàn)材料。
薇菜采回后洗凈，置于105%烤箱中烘烤0.5h，然后置于90%烤箱中烘干，粉碎后過80目篩，備用。
1.1.2儀器設(shè)備。
日本島津公司生產(chǎn)的UV一2550型分光光度計(jì);日本Hitachi公司生產(chǎn)的CR一21G型離心機(jī);上海錦屏儀器儀表有限公司生產(chǎn)的數(shù)顯水浴鍋;寧波新芝生物科技股份有限公司生產(chǎn)的超聲波;廣州儀科實(shí)驗(yàn)技術(shù)有限公司生產(chǎn)的磁力攪拌器;上海瀘西分析儀器廠有限公司生產(chǎn)的2.6cm×20cm層析柱;上海瀘西分析儀器廠有限公司生產(chǎn)的HL-2恒流泵;上海瀘西分析儀器廠有限公司生產(chǎn)的Bs-100A自動(dòng)收集器。
2.2方法
2.2.1黃酮含量的測(cè)定。
按照九里香總黃酮提取工藝的方法進(jìn)行，得回歸方程為：y=0.7083x-0.0065(R2=0.9997)。
將提取的黃酮粗液按照標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作方法測(cè)定其吸光度，利用回歸方程即可計(jì)算黃酮的含量。
2.2.2樣品脫色處理。
稱取適量薇菜粉末，置于500mL燒杯中，加石油醚進(jìn)行脫色處理。
在常溫下，使用磁力攪拌器不斷攪拌，重復(fù)3次，每次5h，抽濾、搗碎，放在90%烤箱中烘干備用。
2.2.3薇菜粗黃酮提取分離。
薇菜粗黃酮提取分離參照薇菜葉總黃酮提取工藝條件優(yōu)化的方法進(jìn)行。
2.2.4薇菜粗黃酮的分離純化。
(1)聚酰胺樹脂的預(yù)處理。
稱取600g聚酰胺粉末于1L的燒杯中，倒入95%的新鮮乙醇煮沸0.5h，然后離心甩干，倒入新鮮乙醇煮沸，重復(fù)3次即可上柱。
(2)聚酰胺的純化方法。
稱取45g備用聚酰胺樹脂，濕法裝入內(nèi)徑為2.6cm×20cm的層析柱中，靜置30min，用5BV超純水洗脫水溶性小分子物質(zhì)。
室溫下，取不同上樣量的提取液以不同的流速通過樹脂，再用不同濃度的乙醇溶液洗脫，測(cè)定其洗脫液的黃酮含量，從而考察上樣量、洗脫流速、洗脫乙醇濃度等因素對(duì)薇菜黃酮洗脫率的影響。
(3)洗脫液黃酮檢驗(yàn)。
將收集的洗脫液，每管取2mL于試管中，測(cè)定黃酮含量，并計(jì)算洗脫峰的洗脫率。
3結(jié)果與分析
3.1上樣量對(duì)薇菜黃酮洗脫率的影響
分別取1mL、2mL、3mL、4mL黃酮提取液上樣，控制洗脫液流速200mL/h，5BV超純水洗脫，然后用70%乙醇溶液洗脫收集。
圖1～4可知，隨著上樣量的增加，最大的洗脫率分別為5.45%、9.73%、14.45%、17.13%，均出現(xiàn)在5～8管之間。
3.2洗脫流速對(duì)薇菜黃酮洗脫率的影響
取3mL(濃度為0.749mg/mL)黃酮提取液上樣，分別控制100、200、300、400 mL/h洗脫液流速，5BV超純水洗脫，然后用70%乙醇溶液洗脫收集。
圖5～8可知，隨著洗脫流速依次減小，洗脫峰時(shí)黃酮含量分別為9.03%、8.50%、14.45%、8.93%。
洗脫液的流速影響層析的分離效果，速度慢會(huì)造成分離時(shí)間長(zhǎng)，譜峰變寬、流速快。
洗脫速度通常要保持恒定，根據(jù)實(shí)際情況，流速為200mL/h適宜薇菜黃酮類化合物的分離。
3.3乙醇濃度對(duì)薇菜黃酮洗脫率的影響
取3mL(濃度為0.749mg/mL)黃酮提取液上樣，分別用30%、50%、70%、90%的乙醇洗脫，洗脫流速控制200mUh洗脫液流速，5BV超純水洗脫，然后用70%乙醇溶液洗脫收集。
試驗(yàn)表明，從圖9～11看出，用50%、70%、90%的乙醇洗脫，黃酮類化合物的洗脫率分別為5.67%、14.45%、7.37%，隨著乙醇濃度的增大，黃酮的洗脫率先增加后減小。
4討論
聚酰胺柱層析法純化薇菜黃酮提取液的最佳工藝參數(shù)為上樣量為3mL(濃度為0.749mg/mL)、控制流速200mL/h、乙醇洗脫濃度為70%、洗脫率為14.45%。
選擇上樣量是提高洗脫率和直接影響黃酮純化的重要因素，當(dāng)上樣量較大時(shí)，在柱子中形成1條較寬的洗脫帶。
在流速和洗脫濃度一定的條件下，洗脫帶過寬不利于高純度黃酮的形成。
當(dāng)上樣量剛好在柱子中形成薄薄的一層，便于洗脫，上樣量過大，聚酰胺吸附帶寬，洗脫時(shí)拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。
因此，選擇上樣量為3mL(濃度為0.749mg/mL)較適合薇菜黃酮分離純化，控制洗脫流速可以提高分離純化薇菜黃酮。
乙醇濃度是洗脫薇菜黃酮類化合物的關(guān)鍵，由于薇菜中黃酮類化合物的溶解度不同，在分離洗脫過程中，70%乙醇洗脫效果最佳。
每個(gè)處理收集的洗脫液，第5～10管黃酮含量相對(duì)于其它管高很多，證明薇菜中主要含有的黃酮類化合物成分集中在這一區(qū)域。
【聚酰胺分離純化薇菜黃酮】相關(guān)文章：
詩經(jīng)采薇教案10-06
不同種植物葉中黃酮的提取及比較10-05
分離小學(xué)作文10-09
分離的經(jīng)典語錄12-05
關(guān)于分離的作文12-21
露薇花的種植方法04-18