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纖維蛋白原的生物化學(xué)分析論文
摘要：纖維蛋白原 (Fibrinogen, Fib) 可能會(huì)引發(fā)心血管、惡性腫瘤、糖尿病等相關(guān)疾病, Fib經(jīng)過遺傳變異之后, 導(dǎo)致人體出血或者產(chǎn)生血栓性疾病。因此, 在臨床領(lǐng)域?qū)ib的測定顯得十分重視。本文對纖維蛋白原的生物化學(xué)進(jìn)行分析, 并對其檢測方式和評價(jià)加以闡述。
關(guān)鍵詞：纖維蛋白原; 生物化學(xué); 檢測方法;
纖維蛋白原的英文縮寫為Fib, 屬于血漿中具有較高含量的凝血蛋白, 主要構(gòu)成要素為巨核細(xì)胞和肝細(xì)胞。從傳統(tǒng)的角度來看, Fib的主要作用是作為消耗性凝血病的診斷指標(biāo), 如若人體中的Fib數(shù)值較高, 則極易引發(fā)冠心病、血栓性疾病、自發(fā)流產(chǎn)等疾病, 因此, 我國對此加強(qiáng)了重視, 并對測定精度等方面的要求也進(jìn)行了提升。
1 纖維蛋白原的生物化學(xué)分析。
1.1 分子結(jié)構(gòu)。
Fib屬于一種對稱二聚體結(jié)構(gòu), 主要組成部分為α、β以及γ鏈。從電鏡顯示中可看出, Fib分子呈現(xiàn)出棒狀的結(jié)構(gòu), 具有3個(gè)球狀區(qū)域。中心地區(qū)位E區(qū), 主要構(gòu)成為6條多肽鏈的N末端, 左右兩邊區(qū)域被稱為D區(qū), 主要構(gòu)成為Bβ以及γ鏈的C末端。其中, Aα鏈的C端不受D區(qū)域的管轄, 具有較強(qiáng)的自由性。E區(qū)和D區(qū)之間有3條多肽鏈, 它們共同構(gòu)成了一個(gè)盤繞螺旋區(qū)域。
1.2 分子性能。
Fib在人體中屬于高度異質(zhì)性的蛋白, 此種特性主要是受到基因多態(tài)的影響, 并且由m RNA的翻譯和剪接以后呈現(xiàn)出來。比如, Aα鏈中, 如若其末端受到絲氨酸、蛋白酶等元素的影響, 在很大程度上對γ鏈和Bβ中的糖鏈成分造成破壞, 則其異質(zhì)性將被充分突顯出來。在國外, 此方面的研究專家Nieuwenhuizen提出, 在人類中存在成千上萬Fib分子, 并且Fib分子中所具備的異質(zhì)性, 不但對生理和病理具有較大的影響, 同時(shí)在利用不同的測定方式對Fib進(jìn)行檢測時(shí), 也將會(huì)獲取不一樣的結(jié)果[1]。
Aα鏈異質(zhì)性的主要體現(xiàn)在于人類外周血中有將近55%的Aα鏈含量, 相當(dāng)于611個(gè)氨基酸, 而其他的45%中也存在著少量氨基酸, 這里所形成的Aα鏈屬于受到酶水解的代謝物質(zhì), 其中包括HMW、LMW兩種, 并且在HMW中具備兩條完整的Aα鏈, 而在LME中存在一條完整的Aα鏈。與LMW相比來看, HMW的凝固性較強(qiáng), 因此使用功能法的方式對Fib進(jìn)行測定的過程中, 分子中存在的異質(zhì)性將會(huì)在一定程度上對最終結(jié)果產(chǎn)生影響。
Bβ鏈的異質(zhì)性不甚明顯, 該鏈條中含有461個(gè)氨基酸, 在測量中對結(jié)果的影響不太顯著。在γ鏈中, 主要包含411個(gè)氨基酸, 專家Francis提出, 對于成人來說, 通常在體內(nèi)的γ鏈分子含量為3種, 即50k D、55k D、57.5k D。其中, 最高γ鏈的產(chǎn)生主要是受到m RNA的影響, 人體內(nèi)的γ鏈含量大約占7%。
2 纖維蛋白原的檢測方式和評價(jià)。
現(xiàn)階段, 由于對Fib的重視程度較高, 因此在測定方式上也變得更加多樣, 其主要檢測原理可以劃分為3大類別, 即可凝固蛋白法、物理-化學(xué)法、免疫學(xué)法。近幾年, 自動(dòng)化血凝儀不斷創(chuàng)新和優(yōu)化, 得到了更加廣泛的應(yīng)用, 在測量方式上, 也從以往的凝血酶時(shí)間測定轉(zhuǎn)變?yōu)镻T-der測定法。
2.1 熱/鹽沉淀法。
我國目前應(yīng)用最為廣泛的Fib測定方式為熱/鹽沉淀法, 按照相關(guān)文獻(xiàn)中的內(nèi)容進(jìn)行操作, 在部分文獻(xiàn)中還推薦了亞硫酸鈉鹽析法等測量方式, 由于此種方式在特異性方面的顯示不甚強(qiáng)烈, 在血漿中易與其他蛋白之間相互產(chǎn)生作用, 對最終測定結(jié)果的精準(zhǔn)度產(chǎn)生不利影響, 因此最后得到的結(jié)果往往偏高。
2.2 von Class法。
在可凝固法中, 最為常用的一種便是von Class法, 此測定方式的原理:首先選擇足夠數(shù)量的凝血酶與稀釋后的血漿相融合, 對其中產(chǎn)生纖維蛋白的時(shí)間進(jìn)行記錄, 蛋白產(chǎn)生的時(shí)間與蛋白原含量之間呈現(xiàn)反比例關(guān)系。此方式的使用十分簡單方便、操作簡易、實(shí)施效率高, 具有良好的特異性, 是當(dāng)前十分受歐美等發(fā)達(dá)國家歡迎的Fib測定方式, 并且已經(jīng)有相關(guān)廠家開始生產(chǎn)與該方式相配套的試劑盒。但由于Fib具有較強(qiáng)的異質(zhì)性, 因此, 在對產(chǎn)物進(jìn)行降解處理的過程中, 其中存在的肝素等物質(zhì)將會(huì)在一定程度上對最終的測試結(jié)果產(chǎn)生干擾[2]。
2.3 可凝固蛋白法。
在可凝固蛋白法的實(shí)施過程中, 主要原理為將凝血酶與血漿相融合, 使Fib凝結(jié)成蛋白狀固體, 對固體進(jìn)行收集后沖洗干凈, 利用適當(dāng)?shù)膬x器稱重, 或者利用尿素或強(qiáng)堿相融合以后, 對比和測定其色澤程度。利用此種方式能夠?qū)ib中的凝血作用進(jìn)行充分反映, 準(zhǔn)確地判斷其功能和性質(zhì)。英國生物標(biāo)準(zhǔn)研究所對此方面進(jìn)行研究后, 提出的Jacobsson改良方式, 與該方法有異曲同工之妙。但是, 由于英國提出的改良方式實(shí)施起來較為繁瑣復(fù)雜, 與此種方式相比來看可行性較差, 因此只能用作參考。
3 結(jié)語。
Fib與心血管疾病、惡性腫瘤、糖尿病等疾病有著密切關(guān)系, Fib的檢測方式多種多樣, 應(yīng)根據(jù)具體的實(shí)際情況進(jìn)行檢驗(yàn), 以此來保障檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和真實(shí)性。
參考文獻(xiàn)
[1]趙靜.蚯蚓蛋白同功酶Ⅲ-1、Ⅱ結(jié)構(gòu)與功能的研究[D].長春:吉林大學(xué), 2014.
[2]王曉霞.H2N (CH2) 7-CO-Gly-Asp-Trp的設(shè)計(jì)、合成及抗血小板作用的研究[D].太原:山西醫(yī)科大學(xué), 2015.
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